兩性電解質在電泳場中形成一個pH梯度，由于蛋白質為兩性化合物，其所帶的電荷與介質的pH值有關，帶電的蛋白質在電泳中向極性相反的方向遷移，當到達其等電點（此處的pH值使相應的蛋白質不再帶電荷）時，電流達到最小，不再移動。本法用于檢測蛋白類和肽類供試品的等電點。
除另有規定外按以下方法測定。
1. 儀器裝置 恒壓或恒流電源、帶有冷卻裝置的水平電泳槽和制膠模具。
2. 試劑
（1）水 （電阻率應不低于18MΩ·cm）
（2）A液 稱取丙烯酰胺5.0g，亞甲基雙丙烯酰胺0.15g，加適量水溶解，并稀釋至50ml，雙層濾紙濾過，避光保存。
（3）B液 10%過硫酸銨溶液，新鮮配制。
（4）甲基紅試液 稱取5mg甲基紅，溶于10mL 0.05mol/L氫氧化鈉中。
（5）50%甘油
（6）正極液 0.5mol/L磷酸溶液
（7）負極液 1mol/L 氫氧化鈉溶液