銅綠假單胞菌群屬單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在 42℃±1℃條件下能生長。
操作步驟如下：
1.增菌培養：取 1:10 樣品稀釋液 10mL 加到 90mL SCDLP 液體培養基中，置 36℃±1℃培養 18h—24h。如有銅綠假單胞菌生長，培養液表面多有一層薄菌膜，培養液常呈黃綠色或藍綠色。
2.分離培養：從培養液的薄膜處挑取培養物，劃線接種在十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板上，置 36℃±1℃培養 18h—24h。凡銅綠假單胞菌在此培養基上，其菌落扁平無定型，向周邊擴散或略有蔓延，表面濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養基常擴散有水溶性色素。在缺乏十六烷三甲基溴化銨瓊脂時也可用乙酰胺培養基進行分離，將菌液劃線接種于平板上，置 36℃±1℃培養 24h±2h，銅綠假單胞菌在此培養基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養基呈紅色，其他菌不生長。
3.染色鏡檢：挑取可疑的菌落，涂片，革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性者應進行氧化酶試驗。
4.氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片置于滅菌平皿內，用無菌玻璃棒挑取銅綠假單胞菌可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的 1%二甲基對苯二胺試液，在15s—30s 之內，出現粉紅色或紫紅色時，為氧化酶試驗陽性；若培養物不變色，為氧化酶試驗陰性。
5.綠膿菌素試驗：取可疑菌落 2 個—3 個，分別接種在綠膿菌素測定培養基上，置 36℃±1℃培養 24h±2h，加入氯仿 3mL—5mL，充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于氯仿液內，待氯仿提取液呈藍色時，用吸管將氯仿移到另一試管中并加入 1mol/L 的鹽酸 1mL 左右，振蕩后，靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時為陽性，表示被檢物中有綠膿菌素存在。
6.硝酸鹽還原產氣試驗：挑取可疑的銅綠假單胞菌純培養物，接種在硝酸鹽胨水培養基中，置 36℃±1℃培養 24h±2h，觀察結果。凡在硝酸鹽胨水培養基內的小倒管中有氣體者，即為陽性，表明該菌能還原硝酸鹽，并將亞硝酸鹽分解產生氮氣。
7.明膠液化試驗：取銅綠假單胞菌可疑菌落的純培養物，穿刺接種在明膠培養基內，置36℃±1℃培養 24h±2h，取出放置于 4℃±2℃冰箱 10min—30min，如仍呈溶解狀或表面溶解時即為明膠液化試驗陽性；如凝固不溶者為陰性。
8.42℃生長試驗：挑取可疑的銅綠假單胞菌純培養物，接種在普通瓊脂斜面培養基上，置于 42℃±1℃培養箱中，培養 24h—48h，銅綠假單胞菌能生長，為陽性，而近似的熒光假單胞菌則不能生長。