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  • 發布時間:2022-10-17 10:58 原文鏈接: 簡述分子克隆化克隆的選擇

      ①直接篩選:有些載體帶有可辨認的遺傳標記,能有效地將重組分子與本底區分。例如:有些λ噬菌體攜帶外源基因后形成的噬菌斑就會從原來的混濁變為清亮;還有些載體分子攜帶外源基因后,形成的菌落或噬菌斑的顏色有明顯變化,如藍色變為無色;有些λ噬菌體能侵染甲菌而不能侵染乙菌,攜帶外源DNA片段后便能侵染乙菌,因此乙菌釋放的噬菌體均為重組分子。

      ②間接篩選:有引起載體分子帶有一個或多個抗藥性標記基因,當外源DNA插入到抗藥基因區后,基因失活,抗性消失。如一質粒有A和B兩個抗藥性基因,當外源基因插入到B基因區后,便只抗A藥而不抗B藥。因此能在A藥培養基上正常生長而不能在B藥培養上生長的便是重組分子。

      ③核酸雜交:廣泛用于篩選含有特異DNA順序的克隆。方法是將菌落或噬菌斑“印跡”到硝酸纖維膜等支持物上,變性后固定在原位,然后與標記的核酸探針進行雜交。陽性點的位置就是所需要的克隆。

      ④免疫學方法:如果重組克隆能在宿主菌中表達,就可以用特異的蛋白質抗體為探針,進行原位雜交,選擇特異的克隆。

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