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  • 發布時間:2019-09-10 10:38 原文鏈接: 粘粒和質粒文庫的擴增實驗

    • 基本方案

               

    實驗材料

    質粒

    試劑、試劑盒

    LB 甘油

    儀器、耗材

    硝酸纖維素膜 培養箱

    實驗步驟

    1.  在含抗生素的平板上加一層硝酸纖維素膜,將抗藥性細菌鋪在硝酸纖維素膜上,培養細菌至菌落邊緣正好相接。


    2.  往長滿菌落的平板中加入LB培養液,10 cm 平板約加2 ml,15 cm平扳約加4 ml。用一支滅菌的細胞刮棒從硝酸纖維素膜上將菌落刮下來,形成菌懸液。

    3.  將平板中的菌懸液收集到一個50 ml 塑料管中,加無菌的甘油至終濃度15%,充分混勻后分裝到1 ml的小管中,每管500 μl,于-70℃凍存(這樣分裝的小份保存超過一年仍能存活)。

     

    4.  篩選文庫時,取出一凍存小管,解凍并滴定細菌濃度,然后將細菌鋪在篩選的濾膜上。

                展開           
    注意事項

    任何擴增步驟最值得關注的問題是每一個初始重組子要得到均等的擴增的機會,若重組菌的增殖率有所不同,將導致擴增文庫的表現度過量或不足。

     


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