糖類染色實驗

實驗方法原理

糖原由多糖衍化而來，是單純的多糖。糖原易溶于水，所以用特殊的 Carnoy 固定液或無水乙醇直接固定才能較好地保存糖原，常用高碘酸（periodic acid）-Shiff 反應（PAS）染色法。

實驗材料 石蠟組織切片

試劑、試劑盒 高碘酸蒸餾水堿性復紅鹽酸 焦亞硫酸鈉（偏重亞硫酸鈉）雙重蒸餾水Mayer 明礬-蘇木精液乙醇二甲苯中性樹膠

實驗步驟

高碘酸氧化液：高碘酸 0.5 g，蒸餾水 100 ml。此液溶解后放入冰箱中待用。

Schiff 染色液：堿性復紅 1 g，1mol/L 鹽酸 20 ml，焦亞硫酸鈉（偏重亞硫酸鈉）2 g，雙重蒸餾水 200 ml。先將 200 ml 雙重蒸餾水煮沸，稍有火焰，加入 1 g 堿性復紅，再煮沸 1 min，冷卻至 50℃ 加入 20 ml1mol/L 鹽酸，待 35℃ 時加入 2 g 焦亞硫酸鈉。室溫中 2 h 之后見稍帶紅色，5 h 之后變為無色液體。棕色瓶內裝好，放入冰箱中保存待用。

1. 石蠟組織切片，常規脫蠟至水。

2. 蒸餾水洗 2 次。

3. 高碘酸氧化液處理 10～20 min。

4. 充分蒸餾水洗。

5. Shciff 液染色，染色 10～20 min（如果室溫在 15℃ 以下時，可在濕盒內加入溫水而加快反應）。

6. 流水沖洗 3 min（對于著色較深的切片可適當縮短時間）。

7. 用 Mayer 明礬-蘇木精液染細胞核 3～5 min。

8. 0.5％ 鹽酸乙醇液分化 30s，自來水浸洗 2 min。

9. 無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

注意事項

1. 糖原固定必須及時取小塊組織進行固定，防止固定不透或不均現象。

2. Schiff 試劑使用時的吸管要清潔，當室溫較低需加熱時，要注意染色不能較深，防止影響染色效果。

其他

結果：糖原物質呈紅色，細胞核呈藍色。