平衡點
值得一提的是，生成1，6-二磷酸果糖后的大部分反應都是向能量升高的方向進行的，沒有酶（磷酸果糖激酶(PFK),磷酸甘油酸激酶(PGK)）的催化，是不會自發進行的。而糖酵解的逆過程--糖異生（從甘油等非糖物質生成葡萄糖）則容易進行，此過程用到大部分在糖酵解里面出現過的酶，除了提到的兩位“車夫”外，它們只出現在糖酵解中。在糖異生這兩步逆反應會放出大量的熱，分別為-14及-24kJ/mol。
無氧環境和有氧環境
在糖酵解中，每分子葡萄糖提供兩分子ATP。真核生物的線粒體能同時從兩分子丙酮酸中另外獲得36分子ATP。能量轉化的多少取決于在細胞質中產生的NADH+H通過線粒體膜的方式。不論在無氧還是有氧環境中，糖酵解成丙酮酸這一過程都能進行。3-磷酸甘油醛在3－磷酸甘油醛脫氫酶GAPDH的作用下脫氫。脫下的氫離子會將氧化劑(輔酶)NAD還原成NADH+H。NAD會在呼吸鏈中再生。若在無氧環境，放熱的(ΔG′=-25kJ/mol)乳糖脫氫酶（LDH）反應會再生NAD：丙酮酸的還原會生成乳糖和再生NAD（酵母則會使用另外兩種酶—丙酮酸脫羧酶加乙醇脫氫酶）。
無氧環境下糖酵解GAPDH-和LDH-反應的相互聯系，除了少部分NADH+H會被磷酸甘油脫氫酶(GDH)轉化外，大部分會用于再生NAD。