一、實驗目的
1、了解紫外可見分光光度計的結構、性能及使用方法
2、熟悉定性、定量測定的方法
二、實驗原理
紫外分光光度法(Ultraviolet Spectrophtometry)，又稱紫外吸收光譜法( Ultraviolet Moleculor Absorption Spectrophtometry)，它是研究分子吸收190.0~1100.0nm波長范圍內的吸收光譜。紫外吸收光譜主要產生于分子價電子在電子能級間的躍遷，是研究物質電子光譜的分析方法。通過測定分子對紫外光的吸收，可以對大量的無機物和有機物進行定性和定量測定。
苯酚是一種劇毒物質，可以致癌，已經被列入有機污染物的黑名單。但在一些藥品、食品添加劑、消毒液等產品中均含有一定量的苯酚。如果其含量超標，就會產生很大的毒害作用。苯酚在紫外光區的最大吸收波長λmax=270nm。對苯酚溶液進行掃描時，在270nm處有較強的吸收峰。
定性分析時，可在相同的條件下，對標準樣品和未知樣品進行波長掃描，通過比較未知樣品和標準樣品的光譜圖對未知樣進行鑒定。在沒有標準樣品的情況下，可根據標準譜圖或有關的電子光譜數據表進行比較。
定量分析是在270nm處測定不同濃度苯酚的標準樣品的吸光值，并自動繪制標準曲線。再在相同的條件下測定未知樣品的吸光度值，根據標準曲線可得出未知樣中苯酚的含量。
三、儀器與試劑
1．UV-1700PC型紫外可見分光光度計（美析儀器）
2．容量瓶（1000ml、250ml）
3．比色管（50ml）
4．吸量管（5ml、10ml）
5．苯酚（AR）
準確稱取苯酚1.000g于200ml蒸餾水中，溶解后定量轉移到1000ml的容量瓶中，作為儲備液。
四、實驗步驟
1．打開儀器及計算機、顯示器、打印機電源，進入軟件操作系統，待儀器自檢結束，點擊OK，進入操作主頁面。
2．波長掃描
(1)確定波長掃描參數：
光譜帶寬2.0nm
光度測量形式 吸光值
掃描范圍 200～500nm
掃描速度 1000nm/min
數據間隔點 1nm
存儲文件 選擇路徑和文件名
(2)做基線
將盛有參比液的比色皿分別放入參比光路和樣品光路，開始進行基線掃描
(3)波長掃描
將盛有樣品和參比液的比色皿分別放入參比光路和樣品光路，點擊開始掃描
(4)定性分析
將試樣的波長掃描圖與已知樣的在相同條件下的波長掃描圖或已知的譜圖相比較，對試樣進行定性分析
3．定量分析
(1) 標準系列的配制
于5支50ml的比色管中，用吸量管分別加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚標準溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻。
(2) 確定定量分析參數
設置a：方法 對每個標準品的重復讀取次數 1
對每個樣品的重復讀取次數 1
是否需要測量標準樣品 需要
校正曲線 線性
計算方式 用峰高計算定量的數值
b：樣品 總共測量樣品的個數 6
輸入待測樣品的名稱 苯酚
樣品標簽從第幾號開始編輯 1
輸入標準樣品濃度值
在std欄中對標準樣品進行標識
c：質量控制 需要質量控制
對有問題的測量結果標記后繼續測量
輸入允許的最大濃度
輸入允許的最低濃度
d：儀器 狹縫 2.0nm
測定形式 吸光值
強度倍數 1
工作波長 270nm
積分時間 5s
把空白液注入兩個比色皿內，并分別放入參比和樣品光路，按“zero”進行調零，然后按“OK”
e：報告 需要報告 要在線報告
f：結果儲存 輸入選擇的路徑與文件名
(3)開始定量測量，按照提示放入各樣品
(4)觀察標準、樣品及校正曲線