紅細胞C3b受體花環試驗

實驗概要

近年來的研究表明紅細胞也是一類免疫細胞。紅細胞免疫功能主要是藉助其膜表面分子(如CR1、CR3、CD58、CD59、DAF、SOD酶等)的免疫粘附作用，在體內起清除垃圾的"清道夫"作用。本實驗介紹了紅細胞C3b受體花環及免疫復合物花環試驗。

實驗原理

紅細胞膜上C3b受體可與補體致敏的酵母菌粘附形成花環(RBC-C3bR花結)；紅細胞膜上粘附的IC中C3b分子可與未致敏的酵母菌粘附形成花環(RBC-IC花環)。

主要試劑

1. 補體致敏的酵母菌試劑：將酵母菌用生理鹽水洗滌3次后，配成1％懸液，置水浴內煮沸20min，充分混勻。用二層定性濾紙(或16層紗布)過濾，除去小凝塊，在低倍鏡下呈單個酵母菌細胞分散狀態。加等量小白鼠血清，混勻后置37℃水浴致敏15min。用生理鹽水洗滌一次，2500r/min離心10min。去盡上清，用生理鹽水重混懸。計數后配成1×10⁸/ml補體(C3)致敏的酵母菌懸液。

2. 瑞氏法染液

實驗材料

待測紅細胞懸液：將肝素抗凝的指血或靜脈血用生理鹽水洗滌離心3次，2000r/min離心3～5min，計數后配成1.25×10⁷/ml 紅細胞懸液備用。

實驗步驟

1. 取兩支小試管，每管加待測紅細胞懸液100ｕl，第一管再加補體致敏酵母菌懸液100ｕl，第二管加未致敏的酵母菌懸液100ｕl，搖勻放37℃水浴30min；

2. 取出用手腕輕輕搖勻，加生理鹽水200ｕl；

3. 混勻后，再加0.25％戊二醛75μl并輕輕混勻；

4. 分別取1/3量水平涂片、吹干、加甲醇固定；

5. 用瑞氏法染色，油鏡下計數。涂片染色后RBC為紅色，酵母菌為藍色。