主要用途
純化線粒體磷氧比（ADP/O）定量檢測試劑是一種旨在通過極譜法檢測系統（polarographic system）測定新鮮活體線粒體在已知濃度ADP存在（III態呼吸）的情況下氧濃度的降低，來分析磷氧比（P：O ratio），以評價線粒體呼吸鏈和氧化磷酸化偶聯程度，即能量轉化效率的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。可以被用于線粒體生理功能和藥物作用機制等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡易，活體檢測，性能穩定。
技術背景
線粒體是細胞呼吸鏈和氧化磷酸化的中心。電子傳遞和ATP合成通過質子梯度偶聯成一體，即線粒體的呼吸耗氧偶聯著ADP與Pi合成ATP的磷酸化反應。線粒體每吸收一克原子氧的同時，生長ATP（ADP磷酸化）的克分子數的比值，為ADP/O值。線粒體的磷氧比直接表征線粒體呼吸耗氧和ATP合成的關系。正常線粒體的ADP/O（P/O）為1.5：磷氧比降低意味著線粒體解偶聯；磷氧比增高意味著線粒體偶聯良好。其最大值為3.3。
產品內容
介質液（Reagent A） 毫升
底物液（Reagent B） 微升
產品說明書 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
CLARK氧電極儀：用于測定溶解氧濃度
實驗步驟
實驗開始前，制備好新鮮的線粒體置于冰槽里備用；同時將－20℃冰箱里的試劑融化，并預熱氧電極儀到25℃。然后進行下列操作。
加入xx毫升介質液（Reagent A）到反應玻璃槽
使用微型磁力子攪拌，充分混勻
密封反應槽
開始記錄氧濃度：起始飽和氧濃度值為0.240微摩爾分子氧/毫升（25℃）
持續記錄1分鐘后，注射加入20微升待測的線粒體（總量2毫克）（注意：氧濃度可能瞬時變化）
持續記錄1分鐘后，注射加入xx微升 底物液（Reagent B）（注意：氧濃度在10秒鐘內開始下滑；參見注意事項9）
持續記錄直至出現線性下行斜線出現拐點
繼續注射加入xx微升 底物液（Reagent B）（注意：氧濃度在10秒鐘內開始下滑）
持續記錄直至出現線性下行斜線出現拐點
測算氧濃度降低值（微摩爾/毫升）：
計算ADP/O：
注意事項
本產品為20次操作
操作時，須戴手套
確保反應玻璃槽潔凈，密閉，以免氧氣流入
線粒體樣品須新鮮制備，建議不要凍存；制備的線粒體膜須完整，非常重要；建議使用線粒體分離試劑盒－YIJI10006.1
注射加入反應槽時，避免氣泡和空氣注入
避免乙醇污染；乙醇增加氧濃度；如果底物或抑制劑須使用乙醇溶解，則加注10微升
保持反應槽溫度恒定，溫度降低，氧濃度升高
反應液充分混勻，和環境氧保持平衡
加注 底物液（Reagent B）前，須充分凍融和混勻
嚴格按照規定加注試劑，切莫增加加注試劑容量
氧濃度百分值轉換為微摩爾/毫升：
公式=【測定值（百分值）÷20.9%（環境標準氧百分值）】X 0.237（系數；微摩爾/毫升）