線粒體和液泡系的超活染色與觀察

實驗原理

活體染色是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。其目的是顯示生活細胞內的某些結構，而不影響細胞的生命活動和產生任何理化變化以致引起細胞死亡。活染技術可用來研究生活狀態下的細胞形態結構和生理、病理狀態。

根據所用染色劑的性質和染色方法的不同，活體染色可分為體內活染與體外活染兩類。體內活染是以膠體狀的染料溶液注入動植物體內，染料的膠粒固定于細胞內某些特殊結構內以達到易于識別的目的。體外活染又稱超活染色，是由活的動植物分離出部分細胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料因其＂電化學＂特性與被染部分相互吸引被選擇固定在活細胞的某種結構中而顯色．但不是任何染料都可作為活體染色劑使用，一般應選擇那些無毒或毒性小的堿性染料(易溶于類脂質)并配成較稀的溶液來使用。詹納斯綠Ｂ和中性紅兩種堿性染料是活體染色中重要的染料，對線粒體和液泡系的染色各有專一性．

詹納斯綠B可專一性地對對線粒體進行活染，這是由于線粒體內的細胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(即有色狀態)，呈藍綠色;而線粒體周圍的細胞質中，這些染料被還原為無色的色基。中性紅對液泡系的染色具有專一性，只將活細胞中的液泡系染成紅色，細胞核和細胞質不著色，這可能與液泡中的某些蛋白質有關。

實驗用品

1 器材：顯微鏡、恒溫水浴鍋、、剪刀、鑷子、解剖刀、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙

2 試劑：

①Ringer溶液:氯化鈉0.85g，氯化鉀0.25g，氯化鈣0.03g

②1/5000詹納斯綠B溶液:稱取0.5g詹納斯綠B溶于5ml Ringer溶液中，稍加熱(30-40℃)溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。取1ml1%原液加入49mlRinger溶液，即得1/5000工作液，將其裝入棕色瓶中備用。最好現配現用，以保持充分的氧化能力。

③1/3000中性紅溶液:稱取0.5g中性紅溶于50ml Ringer液，稍加熱(30-40℃)溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶中于暗處保存。臨用前取1ml1%原液加入29mlRinger溶液，即得1/3000工作液，將其裝入棕色瓶中備用。

3 材料：

人口腔上皮細胞 洋蔥鱗莖內表皮細胞 綠豆幼根根尖

實驗方法

（一）線粒體的超活染色與觀察

1 人口腔黏膜上皮細胞線粒體的超活染色與觀察

載玻片于37℃恒溫水浴：

1/5000詹納斯綠B溶液　　2滴

人口腔上皮細胞黏液　　　牙簽刮取

染色10-15 min，蓋上蓋玻片，吸去周圍染液，顯微鏡下觀察

2 洋蔥鱗莖內表皮細胞線粒體的超活染色與觀察

載玻片于37℃恒溫水浴：

1/5000詹納斯綠B溶液1滴

洋蔥鱗莖內表皮鑷子撕取

染色10-15 min，吸去染液，加Ringer溶液1滴，蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察　

（二）綠豆幼根根尖液泡系的中性紅染色觀察

載玻片于37℃恒溫水浴：

初生綠豆幼苗根尖（1-2 cm）縱切面切片1片

1/3000中性紅溶液1滴

染色5-10 min，吸去染液，加Ringer溶液1滴，蓋上蓋玻片壓扁根尖，顯微鏡下觀察