組織切片的免疫金標記

實驗方法原理 利用膠體金在堿性條件下帶負電荷的性質，與蛋白質分子的正電荷基團籍靜電吸引而形成牢固結合。除抗體外，膠體金還可與其它多種生物大分子，如SPA、PHA、ConA等結合。

實驗材料 組織樣品

試劑、試劑盒 免疫金標記物

儀器、耗材 培養箱顯微鏡

實驗步驟

1.  將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片，放入玻片盒中（每邊放6片），或故濕盒中（載玻片勿相互接觸）。

2.  待載玻片達室濕且未干時，鋪加PBS于切片上（勿溢出玻片）。

3.  稀釋的第一杭體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min（每一載玻片上加40~50 μl 抗體，應能蓋住切片）。

4.  用與泵相連的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并從另一端加上抗體，蓋上加濕盒，室溫溫育1 h。

5.  以PBS冼玻片3次（5 min/次），從切片一端加入新的PBS緩沖液，由另一端吸去舊的緩沖液。

6.  稀釋的第二抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min（每載玻片可加40~50 μl 抗體）。

7.  加免疫金標記第二抗體溫育2 h。

8.  顯微鏡下觀察結果或放密閉玻片盒中，室溫貯放。

9.  顯微鏡下觀察結果，或置玻片盒中貯于4℃。