CMC中效應細胞的制備：
1）用淋巴細胞分離液分離PBMC：
1、抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸鹽（PBS）懸浮細胞。將此懸液小心加在淋巴細胞分離液上，400×g離心30分鐘。
2、離心后紅細胞在管底，PBMC在血漿和淋巴細胞分離液的交界面。收集PBMC，用PBS洗滌細胞兩次，每次離心150×g 10分鐘。低速離心可以減少血小板沉淀，但細胞沉淀物較松散，去上清液時注意丟棄細胞。
3、將細胞懸浮于含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養液中，計數細胞，用1％臺盼藍染色檢測細胞活力（應>90%），再用同樣培養液將細胞配成1×106～2×106/ml。
2）分離大顆粒淋巴細胞：
1、配制不連續Percoll梯度：取Percoll原液與10倍濃縮的PBS以9：1的比例混合，此時溶液為100％
Percoll，比重是1.127，毫克分子滲透壓濃度為290mOsmol/kg。將100％
Percoll與含0.75％牛血清蛋白的RPMI-1640培養液混合配成41.1％、45.8％、50.0％和66.6％的Percoll溶液。在41.4％和50.0％
Percoll溶液中加一滴0.1％臺盼藍，以便區分個梯度溶液的交界面。
2、在50ml離心管中從下向上依次小心加入66.6％、50.0％、45.8％和41.1％的Percoll溶液各10ml，使分別形成明顯的交界面。再小心加水10ml約含5×108PBMC的細胞懸液。水平離心500×g
30分鐘。</P< p>
3、分別收集各交界面的細胞，用RPMI-1640培養液洗滌細胞3次，每次離心500×g
10分鐘。用含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養液將細胞配成適當濃度。LGL的密度較低，主要在41.4％和45.8％的交界面。50％和66.6％交界面細胞主要是T細胞，45.8％和50％交界面細胞是T細胞和LGL的混合物。三個交界面中的細胞都有LAK活性。
3）其它來源的效應細胞：
1、無菌摘取胎兒胸腺、胎肝、胎脾或腫瘤的引流淋巴結，置含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養液的平皿中。
2、在無菌操作下，用注射器芯將上述器官擠壓通過200目的鋼絲網，得到單個細胞。用上述培養液洗滌細胞一次。
3、將細胞懸浮于上述培養液中，計數細胞，用臺盼藍染色檢測細胞活力（應>80％），再用同樣培養液將細胞配成1×106～2×106/ml。
4）LAK細胞的誘生和擴增：
1、向上述各種來源的淋巴細胞懸液中加重組IL-2到1000U/ml。以2×106/ml的細胞濃度，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養3～5天，細胞即具有LAK活性。
2、培養3～5天的LAK細胞數量基本沒有變化。如需較多的LAK細胞，可以繼續培養至2～3周：每當細胞生長到5×106～10×106/ml時分瓶，用同樣培養液將細胞配成1×106～2×106/ml，再加IL-2繼續培養
靶細胞的制備（分離腫瘤細胞和TIL）：
1、無菌摘取腫瘤，置預冷的含抗生素的RPMI-1640培養液中，剪去結締組織，剪碎瘤體至1～2mm大小。放置2～10分鐘讓組織塊沉淀，吸去上清液。
2、將沉淀的組織塊置5～10倍體積的消化液中，37℃中攪拌或振蕩1～4小時或室溫過夜。用力吹打組織塊，即可得到單個細胞懸液。
3、離心400×g 10分鐘，除去消化液。用5倍體積的RPMI-1640培養液懸浮細胞。將細胞懸液小心加到雙層淋巴細胞分離液上。
4、離心400×g 30分鐘，上層分界面是新鮮腫瘤細胞，下層分界面是腫瘤組織中的淋巴細胞（TIL），可用于誘導殺傷活性和擴增。
5、用RPMI-1640培養液洗滌腫瘤細胞兩次，用作檢測LAK細胞活性的靶細胞。此細胞可以在含50％人AB血清和10％二甲基亞砜（DMSO）的RPMI-1640培養液中以1×107～5×107/ml的濃度置液氮中凍存，用前復蘇。