細胞內記錄實驗

膜電位的記錄需要在細胞膜的兩側各放置一個電極形成一個環路，因此將一個電極插入細胞膜內進行相應電特性的記錄時，這種記錄方法即為細胞內記錄法。使用該方法可以準確測量膜電位的絕對值，還能測定興奮性突觸后電位、抑制性突觸后電位及動作電位

細胞

微電極放大器玻璃微電極.微推進器

1.配制實驗所需生理鹽溶液和電極內液。

2.根據具體實驗要求，制備在體或離體的標本。

3.固定標本，使其處于一定機械穩定狀態。

4.拉制形狀、尖端合適的記錄電極，并充灌內液。

5.將固定好的微電極采用步進方式，逐漸接近并插入細胞內部。

6穩定記錄膜電位，并進行刺激－反應測試等相關指標的觀察。

7一般細胞的典型膜電位數值為-80--60mV,在動作電位發生期間，這一數值可以達到40mV(圖3-2)。

1微電極放大器的場效應管屬千高敏感裝置，使用過程中一定要避免靜電荷積累使其擊穿。記錄所需電極應為硬質硅玻璃管，內置細芯，拉制成的電極尖端可達一定細度，又具有相當的硬度，足以刺入細胞。記錄過程中，電極到達組織或細胞表面時，會看到阻抗的變化，此時，要將記錄歸零（相當于胞外電極調零），以便刺穿進入胞膜的電極準確反應膜電位的變化。

1． 細胞內記錄對于標本的穩定性要求極高，這一要求在在體情況下｀更難以達到。實驗中，為盡量使記錄穩定，可以采取如下措施：

① 加強動物固定，視記錄的部位，對于頭部和脊柱等骨質結構均應有相應固定措施；

②動物在自然狀態下，其隨意運動會造成電極與記錄細胞的相對位移，而使記錄不能長久穩定，為減少動物運動造成的不穩定，可以使用肌肉松弛劑（如箭毒）減少動物的運動；

③使用肌肉松弛劑后的動物必須給予人工呼吸，確保其呼吸、循環狀態的良好，同時呼吸的潮氣量要調節適當。

2.電極穿透脂質雙分子層細胞膜的過程中，有時需要對其位置進行略微調整，以便電極與細胞的相對位置處于最佳狀態，保證長時間穩定記錄。同時，電極進入細胞后，不要立即進行去極化刺激，而需要給予一定強度的超極化電流，使膜電位穩定在較靜息值略超極化的范圍持續幾分鐘，所謂“養細胞”。

3.由于微電極的電極電阻很大，因此實驗中一定要進行電極電阻補償，以真實反應膜電位的變化。