1c)將1μL的染色混合液放至12 mm×75 mm的玻璃試管的底部。加入25μL細胞懸浮液,用手腕輕柔地混合。
2c)將10μL的該混合液放在一干凈的顯微鏡載玻片上,蓋上22 mm2的蓋玻片。用一 落射光顯微鏡的40×到60×的干物鏡和一適合觀察熒光素的濾光片結合起來檢查。
3c)計數至少200個細胞,記錄以下四個細胞狀態的每一個數值:①有正常核的活細胞 (VN;有結構的亮綠色染色質);②有凋亡核的活細胞(VA;高濃縮或碎片化的亮 綠染色質);③正常核的死細胞(NVN;有結構的亮橙色染色質);④有凋亡核的死細胞(NVA;高濃縮或碎片化的亮橙色染色質)。
溴化乙錠只能染死細胞。它插入DNA,使DNA呈現橙色;與RNA的結合很弱,呈現出微紅色。因此死細胞有明亮橙色的染色質(溴化乙錠遠超過吖啶橙),而且,它的細胞質如果有任何殘留,就會呈現深紅色。
4c)計算凋亡細胞的百分比(凋亡指數)和壞死的細胞的百分比:
凋亡細胞%=有凋亡核的細胞總數/計數細胞的總數×100% 展開 |