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  • 發布時間:2021-06-09 16:10 原文鏈接: 細胞化學染色檢查(一)

    細胞化學是細胞學和化學相結合的一門學科。細胞化學染色是根據化學反應的原理,應用涂片染色的方法,觀察細胞的化學成分及其變化的重要方法。各種類型血細胞的化學成分、分布及其量不盡相同,且在病理情況下,血細胞的化學成分可發生改變。因此,細胞化學染色不僅對研究血細胞的代謝活動、生理功能,而且對生理和病理情況下血細胞的化學成分的變化、各種類型血細胞的鑒別、某些血液病的鑒別、疾病的療效觀察以及發病機制的探討均有重要意義。由此可見,細胞化學染色是血液病研究不可缺少的手段。在此,對與APL 相關的細胞化學染色的原理、臨床意義以及APL 細胞化學染色的特點做一概述。

        細胞化學染色的原理與臨床意義 細胞化學染色的原理與臨床意義
        1﹒髓過氧化物酶(peroxidase,POX)染色

        (1)原理:血細胞內的POX 分解H 2 O 2,釋出初生態氧,使無色聯苯胺氧化成藍色聯苯胺,后者進一步變成棕黑色化合物,沉著于胞質內。

        (2)正常血細胞染色反應

        1)粒細胞系統:原始粒細胞大多呈陰性反應,有的可出現少量藍黑色顆粒。自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性反應,隨細胞的成熟,陽性反應的程度逐漸增強。中性分葉核粒細胞為強陽性反應,嗜酸性粒細胞陽性反應的程度最強,其陽性顆粒比中性粒細胞粗大,有折光性,嗜堿性粒細胞呈陰性反應。

        2)單核細胞系統:原始單核細胞呈陰性反應,幼單核細胞和單核細胞呈弱陽性反應,陽性顆粒少而細小,彌散分布,有的也可呈陰性反應。

        3)其他細胞:淋巴細胞、巨核細胞、血小板、幼紅細胞、漿細胞和組織細胞均呈陰性反應。有的吞噬細胞可呈陽性反應。

        (3)臨床意義

        1)幫助鑒別急性白血病的類型:急性粒細胞白血病時,白血病性原始粒細胞可呈陽性反應,陽性顆粒一般較多,較粗大,常呈局限性分布;急性淋巴細胞白血病時,原始淋巴細胞和幼淋巴細胞均呈陰性反應;急性單核細胞白血病時,白血病性原始單核細胞呈陰性反應,有時雖少數可呈弱陽性反應,但陽性顆粒少而細小,常彌散分布。

        小型原始粒細胞和原始淋巴細胞不易區別,如果小型原始細胞呈POX 陽性反應,可確定為小型原始粒細胞。

        急性早幼粒細胞白血病有時須與急性單核細胞白血病鑒別,如果白血病細胞呈POX 強陽性反應,應確定為急性早幼粒細胞白血病。

        急性單核細胞白血病有時須與組織細胞白血病或惡性組織細胞病鑒別,異常組織細胞的POX 呈陰性反應,而白血病性幼單核細胞和單核細胞呈弱陽性反應。

        2)成熟中性粒細胞POX 活性的變化

        活性增高:可見于再生障礙性貧血、感染(特別是化膿菌感染)、急性淋巴細胞白血病和慢性淋巴細胞白血病。

        活性減低:可見于急性粒細胞白血病、慢性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、放射病及退化性中性粒細胞。

        2﹒蘇丹黑B(SudanblackB,SB)染色

        (1)原理:SB 是一種脂溶性染料,可溶解于細胞質內的含脂結構中,使胞質中的脂類物質呈棕黑色或深黑色顆粒。

        (2)正常血細胞的染色反應

        1)粒細胞系統:原始粒細胞一般為蘇丹黑反應陰性,有的可出現少量嗜蘇丹黑顆粒,自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性反應,隨細胞的成熟,嗜蘇丹黑顆粒不斷增多。在粒細胞中,中性粒細胞的嗜蘇丹黑顆粒較細小、均勻;嗜酸性粒細胞的嗜蘇丹黑顆粒較粗大,著色偏棕,顆粒邊緣著色深,中心著色淺;嗜堿性粒細胞呈陰性或陽性反應,嗜蘇丹黑顆粒大小不一。

        2)單核細胞系統:原始單核細胞一般為陰性反應,幼單核細胞和單核細胞呈陽性反應,但嗜蘇丹黑顆粒比中性粒細胞少而細小,彌散分布。

        3)其他細胞:淋巴細胞、幼紅細胞、巨核細胞和血小板均呈陰性反應,吞噬性細胞的胞質內可出現少量嗜蘇丹黑顆粒。

        (3)臨床意義

        1)幫助鑒別急性白血病的類型:SB 反應比POX 反應敏感。急性粒細胞白血病時,白血病性原始粒細胞可出現陽性反應,嗜蘇丹黑顆粒較粗大,有時數目也較多;急性淋巴細胞白血病時,白血病性原始淋巴細胞和幼淋巴細胞均呈陰性反應;急性單核細胞白血病時,白血病性原始單核細胞一般為陰性反應,有時少數原始單核細胞可呈陽性反應,但與白血病原始粒細胞的陽性反應比較,嗜蘇丹黑顆粒少而細小,彌散分布。

        2)成熟中性粒細胞SB 的變化

        陽性程度高:可見于再生障礙性貧血。

        陽性程度低:可見于慢性粒細胞白血病,急性粒細胞白血病,急性單核細胞白血病和退化性中性分葉核粒細胞。

        3﹒氯乙酸AS-D 萘酚酯酶(naphtholAS-Dchloroacetateester ase,AS-DNCE)

        (1)原理:血細胞內的AS-DNCE 將基質液中氯乙酸AS-D 萘酚水解,產生萘酚AS-D,進而與基質液中的堅牢紫醬GBC 耦聯,形成不溶性紅色沉淀,定位于胞質內。

        (2)正常血細胞的染色反應

        1)粒細胞系統:原始粒細胞為陰性反應或陽性反應,自早幼粒細胞至中性粒細胞均為陽性反應,酶活性并不隨細胞的成熟而增強。嗜酸性粒細胞為陰性反應或弱陽性反應,嗜堿性粒細胞為陽性反應。

        2)其他細胞:單核細胞為陰性反應,個別可呈弱陽性反應。淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞和血小板均呈陰性反應。

        (3)臨床意義:幫助鑒別急性白血病的類型。急性粒細胞白血病時,白血病性原始粒細胞可出現陽性反應;急性單核細胞白血病及急性淋巴細胞白血病時,白血病細胞均呈陰性反應;急性粒-單核細胞白血病時,部分白血病細胞可呈陽性反應(原粒和早幼粒),有些白血病細胞呈陰性反應(原始單核和幼單核細胞)。

        4﹒酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)染色

        (1)原理

        1)Gomori硫化鋁法:血細胞內的ACP 在酸性(pH5.0)條件下將基質中的β甘油磷酸鈉水解,產生磷酸鈉,進而與硝酸鋁發生反應,形成白色磷酸鋁沉淀。磷酸鋁再與硫化銨發生反應,形成棕黑色的硫化鋁沉淀,定位于胞質內。如果胞質內出現棕黑色顆粒為陽性反應。

        2)偶氮耦聯法:血細胞內的ACP 在酸性條件下,將基質中的磷酸萘酚AS-BI 水解,釋出萘酚AS-BI,萘酚AS-BI 與六偶氮付品紅耦聯,形成不溶性紅色沉淀,定位于胞質內。如果血細胞的胞質呈紅色為陽性反應,無紅色為陰性反應。

        3)抗酒石酸ACP 染色:用相同方法制備2 份基質液,一份再加入適量L-酒石酸(tartaricacid),另一份不加L-酒石酸。取2 張相同標本的涂片,分別用這2 種不同基質液作ACP 染色。如果血細胞內的ACP 耐L-酒石酸抑制的都呈陽性反應;如果不耐L-酒石酸抑制的,不加L-酒石酸的呈陽性反應,而加L-酒石酸的呈陰性反應。

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