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  • 發布時間:2019-11-12 07:42 原文鏈接: 細胞周期測定實驗

    • 細胞計數法

    • BrdU滲入法

    • 流式細胞儀測定法

               

    實驗方法原理

    體外培養細胞 生長、分裂繁殖的能力,可用分裂指數來表示。它與生長曲線有一定的聯系,如隨著分裂指數的不斷提高,細胞也就進入了指數生長期。

     

    分裂指數指細胞 群體中分裂細胞 所占的百分比,它是測定細胞 周期的一個重要指標,也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據。

    實驗材料

    細胞

    試劑、試劑盒

    胰酶 甲醇 培養液 冰醋酸 Giemsa染液

    儀器、耗材

    CO2培養箱 普通顯微鏡 培養皿 蓋玻片 吸管

    實驗步驟

    一、消化細胞 ,將細胞 懸液接至內含蓋玻片的培養皿中。

     

    二、CO2培養箱中培養48小時,使細胞長在蓋片上。

     

    三、取出蓋片,按下列順序操作:

     

    PBS漂洗3分鐘甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘Giemsa液染色10分鐘自來水沖洗。

     

    四、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。

     

    五、計算

    分裂指數=分裂細胞 數/總細胞 數&times;100%

                展開           
    注意事項

     操作時動作要輕,以免使蓋片上的細胞脫落。

     

     

    其他

    Giemsa染液配制

    稱Giemsa粉末0.5 g,加幾滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油總量為33 ml)。56℃中保溫90-120分鐘。加入33 ml甲醇,置棕色瓶中保存,此為Giemsa原液。使用時按要求用PBS稀釋。一般稀釋10倍。


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