一、破碎細胞的方法
1.桿狀玻璃勻漿器法
?該勻漿器由一根端部表面磨砂的玻璃桿和一個內壁磨砂的玻璃套管組成。使用時，先用鋒利的刀片把組織塊切碎，然后把碎塊加入套管中，用力使玻桿移動使組織細胞破碎。
2.高速組織搗碎機法
?使用時將4℃預冷的組織碎塊或細胞懸液加入搗碎機的梅花玻璃杯中，至杯體積的1/3即可蓋好玻璃杯蓋，固定好帶桿葉片刀，緩慢調整旋轉速度，一般開機數十秒后，組織細胞即可被高速旋轉的葉片刀破碎。但不宜時間過長，以防高速旋轉產生熱而導致分離物中的活性物降解，用冷卻水降溫更好。
3.超聲波處理法
?超聲波發生器能產生高強度的超聲信號，經換能器傳送至與之接觸的溶液中，由聲波形成沖擊和振動而產生剪力，致使細胞破碎，動物組織肝、腎、胸腺、淋巴結、腹水細胞、紅細胞、體外培養的細胞均可在短時間內破碎，因超聲時可產熱，應注意冰浴冷卻，生物大分子如核酸和酶對超聲敏感，一般不宜采用
4.化學裂介法
?在細胞懸液中加入Triton-100、NP-40、SDS，去氧膽酸鈉均可使細胞裂解，往往仍需機械去輔助，方可在短時間內使細胞完全裂解，裂解后應清除化學裂解劑，以防止干擾分析。
5.反復凍融法
?組織細胞濃液在-70℃或液氫中冷凍后，于37℃融化，經3～4次凍融周期，可使細胞破碎。
二、部分細胞器的分離方法
一般采用差速離心或密度梯度離心的方法得到分離細胞器。
1.細胞膜的分離
?細胞膜又稱質膜，分離細胞膜有助于研究生物膜的結構與功能。一般說，紅細胞膜與線粒體膜的制備用差速離心法即可，其他細胞膜的分離可根據膜組分的密度大小不同，采用梯度離心后，分布于指定區域，可分離得到純制品
2.線粒體的分離
?線粒體普遍存在于真核細胞中，它是細胞呼吸的主要場所，細胞活動所需能量主要依靠在線粒體內進行氧化所產生的能，線粒體的分離主要靠差速分離。
3.線粒體膜分離
?線粒體膜分離方法主要是密度梯度離心
4.聚核糖體的分離
?核糖體是由核糖酸和蛋白質組成的核糖核酸蛋白顆粒，附著在粗面內質網的稱固著核糖體，分散在細胞內的稱游離核糖體，數個或數十個核蛋白體聚在一起稱為聚核糖體，一般用差速離心法可分離出聚核糖體。
5.微粒體分離
?微粒體是一種脂蛋白所包圍的囊泡，含核糖核酸，蛋白質和脂類，分離微粒體的方法是利用分級離心法，去掉細胞核和線粒體后，經超速離心而制備。
細胞核的分離和細胞脫核技術
細胞核作為一個功能單位，完整地保存遺傳物質，并指導RNA合成，進而表達出相應的蛋白，在一定程度上細胞核控制著細胞的代謝、生長、分化和繁殖活動。因此細胞核的分離是研究基因表達及細胞核形態結構的首要步驟。不同組織來源的細胞經勻漿后，可用分級離心等方法將細胞核進行分離純化。
一、細胞核的分離
?用溶液A粗提離心取沉淀B液中除蛋白，然后于C液中進行蔗糖密度梯度高速離心，沉淀用A液離心洗滌一次可收取。
?(1)溶液A：0.25mol/L蔗糖
?10mmol/L Tris-HCL pH8.0
?3mmol/L MgCL2
?0.1mmol/L苯甲基磺酰氟化物(PMSF為蛋白酶抑制劑，用乙醇現配)
?(2)溶液B：含0.1%(v/v)Triton×-100的溶液A。
?(3)溶液C：2.2mol/L蔗糖
?10mmol/L Tris-HCL pH8.0
?3mmol/L MgCL2
?0.1mmol/L PMSF
操作步驟
?(1)大鼠在實驗前禁食24h，斷頭處死，剖腹切取30g肝細胞用0.9%NaCL充分洗去血污，剪碎肝組織，然后按溶液A8mL/g肝臟組織加溶液A。
?(2)取適量肝細胞懸液，移入帶聚四氟乙稀頭的玻璃勻漿器中，手工勻漿片刻。
?(3)將勻漿液分成6管，以2000g離心10分鐘。
?(4)棄上清液，把粗提的細胞核懸浮于240mL溶液中，并通過4層紗布濾除粗渣。
?(5)溶液分6管，以2000g離心10分鐘，棄上清。
(6)沉淀物懸浮于240ml溶液B中，以2000g離心10分鐘。
?(7)棄上清，沉淀物懸浮于190ml溶液C中，取6支超速離心管，每管加5mL溶液C，然后把細胞核懸液鋪在溶液C上層，以25000r/min離心60分鐘。
?(8)棄去上清，用溶液A輕輕蕩洗管壁及沉淀物表面兩次，將離心管倒置，用濾紙擦干管口。
?(9)向離心管底部滴加幾滴溶液A，用玻璃棒輕輕攪勻，然后補加30mL溶液A。
?(10)以2000g離心20分鐘，棄上清液，沉淀物為純化的肝細胞核。
二、細胞脫核技術
?細胞經松胞菌素B(Cytochalasin B；CB)以10mg/L浸沒,以12000r/min離心15～20分鐘，可使99%的細胞發生脫核，形成無核細胞質體(Cytoplast)和無胞質的核質體(Nucleoplast)