標簽： 大鼠 視神經 少突 膠質
大鼠視神經少突膠質細胞培養可以：（1）獲得大鼠視神經少突膠質細胞；（2）用于視神經損傷修復研究；（3）用于少突膠質細胞相關課題研究。
牛血清培養法
Wistar大鼠
亞硒酸鈉 腐胺 轉鐵蛋白 胰島素 甲狀腺素 黃體酮 谷氨酰胺 小牛血清 兔抗鼠GC抗體
眼科剪 滴管 離心機 培養皿 CO2培養箱
一、實驗步驟
1. 取新生2 d 的Wistar大鼠10 只，無菌條件下取出雙側視神經。
2. 接種至24孔培養板內經多聚賴氨酸處理的蓋玻片上。
3. 加入含30g·L-1 小牛血清的DMEM/F12 培養基，37°C，50mL/L CO2，100%濕度連續培養3 d 。
4. 3 d 后棄廢液，改為含 5g·L-1 小牛血清DMEM/F12 條件培養液繼續培養。
5. 每周換液2次。在獲得足夠的細胞數量后，改用無血清條件培養液繼續培養，每2 d 換液一次。
二、形態學觀察每天在倒置顯微鏡，觀察培養細胞的生長過程和形態學變化并拍照。三、免疫細胞化學鑒定
1. 將含細胞蓋玻片取出，0.01 mol·L-1 PBS沖洗3 次×5 min。2. 冷丙酮固定10 min。3. PBS沖洗(3 次×5 min)。4. 30g·L-1 過氧化氫室溫孵育15 min。5. PBS沖洗3 次×5 min。6. 滴加正常山羊血清，室溫孵育20 min。7. 滴加1:100 GC抗體，陰性對照以PBS代替一抗，37°C孵育60 min。8. PBS沖洗3 次×5 min。9. 滴加 生物素標記羊抗兔IgG，37°C，20 min。10. PBS沖洗3 次×5 min。11. 滴加辣根酶標記鏈酶卵白素工作液。12. DAB工作 液顯色，自來水終止反應。13. 脫水，透明，DPX封片保存。
四、結果
1. 形態學觀察結果
組織塊24 h 開始貼壁，48～72 h 可見神經組織邊緣游出少量細胞，主要為圓形或梭形(圖 1)。8～9 d 左右，細胞基本鋪滿培養孔。此時改用無血清條件培養基培養進行純化。培養過程中，部分細胞死亡。12 d 左右獲得的細胞胞體基本為呈圓形或多角型，直徑約 6～10 μm。細胞核較大，胞質少(圖 2)。
