細胞雜交

PEG

完全培養基 無血清培養基 NaOH

皮氏培養皿 通用容器

PEG 1000 ( Merck)：

(a) 髙壓處理PEG，將其液化及滅菌。

(b) 將 PEG 冷卻到 37°C ，然后與預熱至 37°C 的等體積無血清培養基混合。

(c) 用 1.0 mol/L NaOH 調整 pH 至約 7.6~7.9。

(d) 溶液于 4°C 儲存最長為2 周。

A. 單層培養細胞的融合：

1. 將兩種等量待融合的細胞分別接種于 50 mm 細胞培養皿。每個親代細胞系接種濃度在 2.5X10⁵~2.5X 10⁶ /皿之間即可。

2. 將混合的細胞過夜培養。

3. 將 PEG-無血清培養基加溫至 37°C ，此時需要用 NaOH 重新調定 pH。

4. 棄凈原培養液，用無血清培養基洗滌細胞一次。

5. 加入 3.0 ml PEG 溶液，使其覆蓋單層細胞。

6. 精確計時 1 min，之后棄去 PEG，用 10 ml 無血清培養基洗滌單層細胞，改換完全培養基。

7. 過夜培養細胞。

8. 再加入選擇性培養基。

B. 懸浮培養細胞的融合：

9. 將兩種親代細胞混合（各為 4X10⁶ 個細胞），室溫、150g 離心 5 min。后續離心和融合過程均在 30 ml 的塑料通用容器或離心管中進行。

10. 用 15 ml 無血清培養基將沉淀制成懸浮液，再次離心。

11. 吸去所有的培養基。

12. 用吸管小心加入 1 ml PEG 溶液，輕輕吹打，懸浮細胞。

13. 1 min 后，用 9 ml 無血淸培養基將細胞懸液稀釋，將其等分到 2 個通用容器或 1 個預盛 15 ml 無血清培養基的離心管中。

14. 以 150 g 離心 5 min，棄去上清，用完全培養基再次懸浮細胞。

15. 37°C 過夜培養。

16. 在選擇性培養基中克隆細胞。