6.非同種細胞污染
即細胞交叉污染,一般來自細胞建株和細胞傳代過程中兩種或兩種以上細胞之間的混合污染。一種是由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染,另一種情況則是提取原代細胞時在消化過程中由于剪割的組織塊不夠純,消化時間把握不好,容易把雜質細胞消化混入原代細胞培養中。
二、預防細胞污染
1.室內環境
(1)細胞培養室要有操作間、緩沖間和更衣室;
(2)房間裝修密閉性較高,且不宜開設外窗,無菌間的房頂、墻壁和地面均應光滑、無死角,室內應有紫外線殺菌裝置;
(3)實驗臺和儀器布局應合理。一般來說,二氧化碳培養箱和凈化工作臺或生物安全柜不應對著門擺放,離心機和顯微鏡不應離得太遠。
2.實驗用品
(1)購買合格的細胞,并留種凍存,必要時可將細胞懸液加入肉湯培養基或瓊脂培養基中,觀察是否有微生物滋生;
(2)細胞培養所用物品的清洗、消毒要徹底,各種溶液滅菌除菌要仔細,操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌;
(3)細胞培養過程中涉及到的自行配制的溶液要經過高壓濕熱滅菌(如水、磷酸鹽緩沖溶液等)或0.22μm無菌濾膜過濾(不耐高溫的溶液)、并檢測確認為無菌后,方可使用;
(4)不同細胞在傳代或換液時所用器具應嚴格區分,避免細胞間交叉污染。
3.實驗人員
(1)操作人員進培養室前,必須先洗手,在緩沖間換穿專用實驗服和拖鞋,嚴禁在實驗進行時頻繁出入培養室;
(2)操作要準確、敏捷、有序;
(3)吸取溶液時,應專管專用,避免交叉污染;
(4)吸管管口要向下傾斜, 以防止液體倒流進入移液器內發生污染;盡量減少細胞和培養基的敞口時間;
(5)已開口的試劑瓶盡可能的傾斜放置,防止下落微生物的污染;
(6)避免在敞口的細胞培養皿及培養皿蓋上方操作;不要面對工作臺或細胞培養箱講話或咳嗽,防止口腔微生物隨唾沫飛入而發生污染;
(7)若發生外溢,用蘸有消毒酒精的棉球及時擦去;
(8)實驗后應將實驗產生的廢物和廢液及時清理出培養室,并清潔無菌工作臺。
三、結語
讀完了本文,您是否對細胞污染有了更多的了解呢?您知道應該怎樣預防細胞污染了嗎?
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