溶液準備
2×樣品緩沖液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） , 20% （ v/v ） 甘油 , 4.6% （ w/v ） SDS , 0.02% 溴酚藍 ,
2%DTT
PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，50mM NaCl，2.7mM KCl
RIPA緩沖液：50mM Tris-HCl（pH7.4），150mM NaCl，1mM EDTA，1%Triton×100
，1%去氧膽酸鈉，0.1%SDS，1mM PMSF，1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制劑 （ aprotinin ），1μg/ml亮抑蛋白酶肽 （
leupeptin ）
裂解液緩沖液：10mM Tris-HCl（pH7.4），0.15M NaCl，5mM EDTA（pH8.0），1%Triton×100；使用前加5mM DTT，0.1mM PMSF異丙醇和5mM ε-氨基己酸。
2. 裂解液的制備
A. 制備細胞裂解液：
①收集胰蛋白酶消化的細胞并離心，用PBS清洗。
②用100μl RIPA緩沖液冰浴溶解沉淀10min（每500000個細胞20μl RIPA緩沖液）。
③10000rpm，4℃離心10min，取上清轉移至新管。
④用考馬斯亮藍法檢測蛋白質濃度。
⑤用裂解緩沖液將溶液濃度調到5mg/ml,每小瓶中放100μl，-80℃儲存。
⑥按照1:1體積比混合2×樣品緩沖液，煮沸5min后，室溫放置5min.
⑦短時離心后點樣電泳檢測。
B． 制備組織裂解液：
①在制備過程中一直將溶胞液或組織放在冰上。
②切開組織，稱取組織1.5g于PBS中清洗。
③在RIPA緩沖液中剪碎組織后，轉移到勻漿器中，加足5ml RIPA緩沖液，研磨20min.
④將研磨液轉移到1.5ml的離心管中，14000rpm，4℃離心10min.
⑤取上清液作為完整的組織裂解液。
⑥用考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度。
⑦用裂解緩沖液將溶液濃度調到5mg/ml，每小瓶中放100μl，-80℃儲存。
⑧按照1:1體積比混合2×樣品緩沖液，煮沸5min后，室溫放置5min.
⑨短時離心后點樣電泳檢測。