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  • 發布時間:2020-08-17 19:05 原文鏈接: 細胞膜流動性測定實驗

    實驗方法原理 常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區后,介質粘度增加,順反異構受到抑制,成為唯一能發光的全反構型。

    實驗材料 腫瘤細胞

    試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖液DPH

    儀器、耗材 熒光分光光度計離心機

    實驗步驟

    1.  取對數生長期的腫瘤細胞,以pH7.2,0.01 mol/l 磷酸鹽緩沖液洗滌兩次。


    2.  取107個細胞,離心,加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。


    3.  25℃振蕩溫育30 min,再以PBS洗滌1次。


    4.  懸浮于4 ml PBS溶液中。


    5.  測定儀器為熒光分光光度計,在激發波長362 nm,發射波長432 nm,狹縫10條件下測定熒光強度。

    注意事項

    由于DPH可進入細胞內部,后來又合成了其陽性離子衍生物1-(4-三甲胺苯基)-6-苯基-1,3,5-己三烯(TMDPH)。TMDPH不能透過細胞膜進入細胞,因此,理論上TMDPH標記法較DPH標記法更能準確的反映膜脂流動性。


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