細胞膜糖類 電鏡 顯示技術 免疫組織化學實驗技術及應用 第十四章
細胞膜糖類電鏡顯示實驗可以用于:觀察細胞膜上的糖蛋白和糖脂。其顯示技術較常用的是凝集素細胞化學技術,此外,還有釕紅染色法等。
實驗方法原理 | 釕紅染色法的原理是釕紅可以與羧基(酸性基)通過靜電結合,電鏡下呈電子密度高染色。
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實驗材料 | 組織樣品 |
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試劑、試劑盒 | 釕紅原液戊二醛二甲胂酸鈉緩沖液鋨酸 |
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儀器、耗材 | 移液槍 |
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實驗步驟 | 1. 釕紅原液配制
釕紅溶于雙蒸水,濃度為 10 mg/ml,60℃,振蕩 10 min,3000 r/min 離心約 15 min,取上清冷藏保存。
2. 前固定液 3% 戊二醛 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸鈉緩沖液(pH 7.3)2.5 ml,釕紅原液 2.5 ml 順序混合。
3. 后固定液 2% 鋨酸 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸鈉緩沖液(pH 7.3)2.5 ml,釕紅原液 2.5 ml 順序混合。
4. 標本切小(1 mm3),置于前固定液中室溫 1 h。
5. 0.1 mol/L二甲胂酸鈉緩沖液漂洗3次,每次 3 min。
6. 1% 鋨酸后固定液中室溫固定 2 h。
7. 漂洗、脫水、包埋同常規。 展開 |
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注意事項 | 細胞質膜用重金屬染料如:釕紅染色后,在電鏡下可顯示厚約10~20nm的結構,邊界不甚明確. |
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其他 | 在植物病蟲害組織切品染色中,可將宿主植物組織中菌絲體和孢子染成紅色。
來源于《免疫組織化學實驗技術及應用》 |
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