細胞計數和活力測定實驗方法

器材和試劑： 
1. 倒置相差顯微鏡，具有10×物鏡；
2. 標注體積刻度的試管（圓錐形底）；
3. 改良的Neubauer血細胞計數器；
4. 計數器蓋玻片；
5. 袖珍管或等體積的塑料容器，如試管或離心管；
6. 巴斯德吸管（短型和長型）；
7. 可調體積的微量加樣器（100—250μl）；
8. 無菌槍尖；
9. 無菌刻度吸管（1—10ml）、洗耳球或自動移液裝置；
10. 10g/L臺盼藍；
11. Hanks平衡鹽溶液或儲存培養基；

實驗方法：
1. 準備計數器。輕輕地濕潤中央網絡區域的各個邊，用兩個拇指的壓力使蓋玻片水平地從邊緣滑動。當在中央標記區臨近的任何一邊能看見牛頓環（彩虹色）時，蓋玻片位置正確；
2. 1000r/min離心細胞懸液5min，棄上清。將細胞重懸于已知體積的培養基中；
3. 用巴斯德吸管來回吹打細胞懸液幾次，混勻，確定細胞均勻分散；
4. 用微量加樣器吸取250μl混勻的細胞懸液，轉入袖珍管。用一個干凈的加樣器尖吸取等體積臺盼藍溶液加入細胞懸液中。用拇指和食指快速輕彈袖珍管幾次使之混勻。立即用一個巴斯德吸管尖吸取一滴細胞懸液，輕輕地將其滴在臨近計數區的蓋玻片邊緣上。毛細作用使細胞懸液移到蓋玻片下面，填滿中央和邊緣溝之間的區域。在蓋玻片的另一邊重復該操作；
5. 將計數器放于顯微鏡載物臺上，移動載物臺直到將三條平行線界定的25個小方格的網格位于中央為止。計25個小方格內的總細胞數（染色和未染色的）（它們每一個又再分為16個更小的方格便于計數）。為了避免將同一個細胞重復計數，只數三線隔開的壓上線、左手線和中央區的細胞。如果細胞數大可用一個計數器；
6. 數完總細胞數時，在相同區域重復計數，只數藍染（死）的細胞。計算死細胞的平均數，從總細胞數中扣除死細胞數得到活細胞數；
7. 應用以下公式計算細胞群的存活率：
存活率=活細胞數/（活細胞數+死細胞數）×100%
8. 細胞懸液的細胞濃度按照一下方法計算：
1個大格（25個小格）的平均細胞數×10⁴=細胞數/ml
9. 細胞懸液總細胞數=細胞數/ml×總體積
10. 細胞懸液總的活細胞數=總細胞數×存活率（%）