細胞骨架的顯示和觀察

一、實驗目的
　　掌握植物細胞骨架的光鏡標本制作方法。

二、實驗原理　　
細胞骨架是指細胞質中縱橫交錯的纖維網絡結構，按組成成分和形態結構的不同可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細胞形態的維持、細胞的生長、運動、分裂、分化和物質運輸等起重要作用。光學顯微鏡下細胞骨架的形態學觀察多用1% Triton X-100處理細胞，可使細胞膜溶解，而細胞骨架系統的蛋白質被保存， 再用考馬斯亮蘭R250染色，使得胞質中細胞骨架得以清晰顯現。

三、材料、試劑和儀器
　　1． 材料
　　　　新鮮洋蔥鱗莖、人口腔上皮細胞
　　2． 試劑
　　　　1） M緩沖液（pH 7.2）各成分終濃度為：
　　　　　　50mmol/L咪唑(MW:68.08),
　　　　　　50mmol/L KCl(MW:74.55),
　　　　　　0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30),
　　　　　　1mmol/L EGTA(MW:380.36),
　　　　　　0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24),
　　　　　　1mmol/L DTT(MW:154.3)
　　　　2） 6mmol/L PBS磷酸緩沖液 （pH 6.5）:
　　　　　　KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3 (見附錄3 查磷酸緩沖液的配置)
　　　　3） 0.7% NaCl生理鹽水
　　　　4） 1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于 M-緩沖液
　　　　5） 3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL
　　　　6） 0.2% 考馬斯亮藍R250染液 200mL:
　　　　　　考馬斯亮藍R250 0.2g,
　　　　　　甲醇 46.5mL,
　　　　　　冰乙酸 7mL,
　　　　　　蒸餾水46.5 mL

　　3．儀器
　　　 光學顯微鏡，鑷子，剪刀，試管，表面皿，滴管，載玻片，蓋玻片,滅菌牙簽，1.5mL離心管，1mL吸頭，1mL取液器，酒精燈，染色缸

細胞骨架動畫

四、實驗程序

五、結果與分析
　　洋蔥鱗莖外層與內層的表皮細胞比較（放大倍數10×20）