細胞RNA含量樣品的制備及分析

單細胞懸液

PY 試劑 醋酸緩沖液 磷酸緩沖液 DNA 酶消化液

一、試劑配制

1. PY 試劑的配制：PY 1.0 g 以 100 ml 蒸餾水溶解，配成母液，置 4℃ 冰箱保存。PY 工作液：取 1 ml PY 母液，加入 1 mol/L pH 4.7 的醋酸緩沖液 100 ml，稀釋為 0.01% 的濃度。

2. 1.0 mol/L pH 4.7 醋酸緩沖液的配制：冰醋酸 11.55 ml 加蒸餾水至 1000 ml；無水醋酸鈉 16.4 g 加蒸餾水至 1000 ml；分別取上述兩種液體 255 ml 和 245 mI，再加入 200 ml 蒸餾水即成。

3. 配制 pH 7.2 的磷酸緩沖液。

4. DNA 酶消化液的制備：DNA 酶 0.05 mg/ml，0.25 mol/L 枸櫞酸，2.5 mol/L TrisHCl，調 pH 為 6.0。

二、染色程序

1. 制備單細胞懸液，濃度為 1x10⁶/ml。

2. 加入 DNA 酶液 0.5 ml，37℃，消化 20 min，棄去 DNA 酶。

3. 加入 0.01% 的 PY 工作液 1.0 ml，室溫下染色 30 min，離心沉淀（800 r/min 離心 5 min）。

4. 去染色液，以 PBS 液洗 3 次，再加入 1.0 ml PBS，上機檢測。