細菌的人工培養

人工制備營養充足的培養基并提供適宜的溫度、氣體、pH等培養條件，即能使細菌  在體外環境迅速生長繁殖。細菌培養對臨床上病原菌的分離鑒定、制備抗生素、制備疫苗等生物制品都是必不可少的。
一、培養基的制備原則：
1、必須有充足的營養。
2、合適的酸堿度。
3、絕對無菌。
二、培養基的制備
培養基是用人工方法將多種營養物質按照各類微生物  生長的需要而合成的一種混合營養料。
常用的培養基有基礎培養基、營養培養基、選擇培養基、鑒別培養基、厭氧培養基等。
按照培養基的物理性狀可分為液體，固體和半固體三類。
以下介紹常用基礎培養基的制備。
（一）肉湯培養基：
制法：稱取營養肉湯粉1.8g（含牛肉膏0.3克g，蛋白胨1g、氯化鈉0.5g）加入100ml蒸餾水中，用玻棒攪拌加熱溶解。按需要分裝于三角瓶或試管，瓶口或管口塞棉塞，包裝后置高壓蒸汽滅菌器內，在0.11Mpa（1.05公斤/厘米2）壓力下，溫度達1210C，維持15～20分鐘。冷卻后貼好標簽，40C冰箱貯存備用。
制成后的肉湯呈淺黃色，清晰透明，pH 7.1+0.2
肉湯培養基常用于增菌培養。
（二）肉湯瓊脂  固體培養基：
在上述肉湯培養基中加入2～3%瓊脂即成。經高壓滅菌后，趁熱將試管斜置、冷凝，即成普通瓊脂斜面培養基；或趁熱取出后，稍冷，以無菌操作傾入滅菌的空培養皿，冷凝后即為普通瓊脂平板。制作瓊脂平板時，每一空皿（9厘米直徑）需培養基15～20ml。
普通瓊脂平板用于分離培養繁殖細菌；普通瓊脂斜面用于純培養和保存菌種。（瓊脂是從石花菜等海藻類中提取的多糖物質，當溫度達到98℃以上可溶化，45℃以下則凝固。瓊脂對細菌一般無營養作用，用做斜面、平板、高層等不同類型固體培養基的凝固劑。瓊脂通常呈酸性，加入液體培養基中可使酸堿度下降pH 0.2左右。）
（三）肉湯瓊脂半固體培養基：
在上述肉湯培養基中加入0.3～0.5％瓊脂，加熱溶化后，分裝于小試管（10×100mm），每管約3ml，高壓滅菌后直立冷凝即成。
半固體培養基用于檢查細菌的動力和細菌菌種的保存。
三、常用培養基介紹
（一）基礎培養基
基礎培養基含有大多數細菌生長繁殖時所需要的氮源、碳源、無機鹽類、水份等最基本的營養成份，可供大多數細菌生長，并可作為營養、鑒別及選擇培養基的基礎原料。常用的如肉湯培養基。
（二）營養培養基
在基礎培養基中添加一些其他的營養物質，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長因子等，可供培養營養要求較高的細菌。例如血瓊脂平板、血清肉湯培養基等。
（三）鑒別培養基
利用各種細菌分解糖類和蛋白質的能力及其代謝產物的不同，在培養基中加入特定的作用底物，觀察細菌在其中生長后分解底物的作用，從而鑒別和鑒定細菌。例如，單糖發酵管就是在無糖的基礎培養基（蛋白胨水）中加入某種糖類及指示劑，因不同細菌對各種糖類發酵作用不同而鑒別之。
（四）選擇培養基
在培養基中加入某種化學物質，使之抑制某一類細菌生長，而有利于另一類細菌生長，從而將后者篩選出來，常用在含有雜菌的標本中分離某種致病菌，例如SS瓊脂平板。
（五）厭氧培養基（見實驗十-厭氧性細菌，P.80）
四、細菌的接種技術和培養方法：
一般細菌都可用人工方法進行培養，以進一步研究它們的各種生物學特性。培養細菌時，根據研究目的和細菌生長條件的差異，需采用不同的接種技術和培養方法。
（一）細菌的接種技術
接種技術一般分為分離培養接種法和純種細菌接種法，正確的接種技術是獲得典型的生長良好的細菌培養物所必需的。