2．NAATs：Roche公司的AMPLICOR試劑是第一代基于PCR的NAAT；而BD公司的BDProbe Tec是第一代基于SDA的NAAT。這些試劑擴增的目標序列通常位于染色體DNA或質粒中。BDProbe Tec目前有兩種：一是檢測CT的BDProbe Tec CT，另一種是可以在一份標本中同時檢測CT和GC的BDProbe Tec CT/GC。新近出現的CT/GC NAAT是Gen-Probe公司的Combo 2試劑，它是基于TMA的第二代NAAT，通過在一份標本中同時擴增CT和GC的rRNA分子而對二者進行檢測和確定。這種試劑采用一種獨特的目標捕獲方法對目標分子進行純化和濃縮以去除可能存在于標本內的抑制物。目標捕獲方法采用特異性探針將目標rRNA分子結合到磁微粒上，未結合的分子經洗滌除去。隨后已經過純化和濃縮后的目標分子通過TMA進行擴增。
3．檢測CT和GC的直接NATs的靈敏度和特異性：檢測CT的NAATs通常比非擴增的NATs和CT培養的靈敏度高，而檢測GC的NAATs的靈敏度與培養和非擴增的NATs相似。采用拭子標本的所有檢測CT的NAATs一般都有較高的靈敏度(>90%)，其中Combo 2試劑的靈敏度最高（>90%）。
對于泌尿生殖道標本，PACE 2試劑盒被批準只可采用男性尿道和女性宮頸內拭子標本檢測CT和GC。而NAATs不僅可以采用拭子標本、也可使用尿液標本。由于尿的采集是非侵入性的，易于被病人接受，同時也減輕了工作負擔。由于高水平抑制物質的存在，采用尿標本的第一代NAATs的靈敏度比采用拭子標本低5-10%，這點在女性更為明顯。采用PCR方法（如AMPLICOR試劑）檢測女性尿標本中GC的效果尚不清楚。SDA方法已獲批準可以采用男性和女性尿標本進行檢測，但女性尿標本檢測靈敏度比宮頸內拭子標本低大約10%。Combo 2靶捕獲方法可以減少抑制，因此采用該試劑檢測尿標本的靈敏度高達91%-100%。
CDC最近發表了CT和GC檢測指南（表4）。NAATs因其高靈敏度被推薦用于CT檢測，但也可采用探針檢測和EIA方法。對于GC檢測應首選拭子標本培養，因其具有很高的靈敏度，并能進行藥敏檢測。NAATs和探針檢測的靈敏度與GC培養相似，當因轉送和儲存條件不佳難以進行培養時推薦采用NAATs和探針檢測。不論CT還是GC感染，所有檢測方法均推薦采用男性尿道和女性宮頸內拭子標本。如果侵入性的拭子采集方法不被接受或不能采集，NAATs可采用尿標本。由于交叉污染或某些第一代NAATs可以和非淋病奈瑟菌發生非特異性反應，CDC建議核查一些陽性結果以排除假陽性。在低流行人群中，對CT/GC NAAT結果陽性者應進行附加NAAT檢測以排除可能出現的假陽性結果，避免給患者帶來不良影響。陽性結果的確認應采用不同的NAAT或采用技術相同但擴增不同CT/GC序列的NAAT，以幫助排除假陽性結果。
表４. CDC推薦篩查男女CT和GC感染的檢測方法
病原體 檢測方法
采用拭子或尿標本的NAAT
采用拭子標本的非擴增NAT、EIA
衣原體（CT） 或DFA
拭子培養
拭子培養
淋球菌（GC） 采用拭子標本的NAAT
或非擴增NAT
采用尿標本的NAAT
五、直接NATs的未來發展趨勢
提升自動化程度使操作更容易是直接NATs的未來發展趨勢之一。現行的直接NAT儀器大多只能自動化操作檢測過程中的一部分（如擴增或測定）。新的全自動儀器如TIGRIS DTS（Gen-Probe公司）可以自動化完成所有檢測步驟，每12小時最多可進行1000個測試。
一些以往采用繁雜、冗長檢測方法的NAATs正開始使用測定擴增反應中產生的復制序列的探針（實時檢測）。實時擴增技術尤其適用于定量檢測。
多元化檢測也是未來發展的一個方向，它可以用一項檢測來測定多個病原體。相信擴增技術、生物芯片和微流體技術的應用最終能夠使我們采用一項檢測、用一份標本來檢測多個不同的病原體，不僅快捷、而且具有良好的性價比。
六、結論
直接NATs代表了檢測細菌感染的診斷方法上的一項突破。快捷、精確、采用標本靈活使得直接NATs在臨床實驗室的用量持續增長。在諸如CT感染等多種細菌感染的診斷中，直接NATs正在越來越多地替代培養和其它常規方法。在ＴＢ的診斷中，由于需要區分不同的分枝桿菌和測定藥敏，所以NAATs還不能完全取代培養，但NAATs和培養可以取長補短、聯合用在ＴＢ的診斷中。用于分枝桿菌的NAATs的未來發展包括檢測不同分枝桿菌的多元化測定和藥敏測定。更新一代的直接NATs也正在研發中。
七、參考文獻（略）
作者簡介：Florence Paillard, PhD，美國科學和醫學專業作家；Craig S. Hill, PhD，美國Gen-Probe公司科學事物主管。
