細菌抗酸染色可以應用于（1）不易于其他染色料的細菌進行染色（2）細菌的形態分析。
| 實驗方法原理 | 結核分枝桿菌對苯胺染料一般不易著色，若加溫或延長染色時間使其著色后，再用3%鹽酸酒精處理也不易脫色，經此染色后，結核分枝桿菌及其他分枝桿菌呈紅色，而非抗酸菌和細胞雜質等呈藍色。 |
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| 實驗材料 | 結核病人痰 |
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| 試劑、試劑盒 | 抗酸染色液鹽酸酒精呂氏美藍染液 |
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| 儀器、耗材 | 顯微鏡玻片接種環 |
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| 實驗步驟 | 1、取潔凈的竹簽沾取痰中血絲或膿性痰，在清潔無油脂玻片上涂開。涂抹區約拇指蓋大。用過的竹簽放到空平皿內待高壓滅菌。
2、涂片自然干燥后，用片夾挾住玻片一端，通過火焰固定。
3、涂抹面用濾紙片蓋上，然后往濾紙片上滴加石炭酸復紅染液，使濾紙片完全被染液浸濕，持玻片在小火上加溫片刻然后離開火焰，此時可見到玻片上冒出蒸氣。待蒸氣消失后再加溫，如此反復3～4次，約5min，加溫時隨時添加染液勿使紙片干涸。
4、玻片冷卻后，用接種環挑去濾紙扔到污物盆內，流水沖洗玻片。
5、滴加3%鹽酸酒精脫色，至涂抹均勻部位基本沒有紅色再脫下為止，水洗。
6、滴加呂氏美藍染液30sec，水洗。
7、吸干、鏡檢。
4、溶液配制
萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸復紅液：鹼性復紅4g，溶于95%酒精100ml，作成飽和溶液，再取該飽和液10ml與5%石炭酸溶液90ml混勻即成。
(2)3%鹽酸酒精液。
濃鹽酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)呂(Loeffer)氏美藍染色液
美藍2g，溶于95%酒精100ml中，作成飽和液。再取該飽和液30ml與0.01%氫氧化鉀水溶液100ml混合均勻即可。 展開 |
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| 注意事項 | 1. 生物樣品在使用時禁止直接接觸，避免感染。
2. 使用完需要滅菌處理并且放置到指定位置統一處理。 |
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| 其他 | 抗酸染色法acid－fast staining method 1882年由埃利希（F．Ehrlich）首創并經F．齊爾（Ziehl）改進而創造出的細菌染色法。其中最具代表性的為對結核菌的齊爾-尼爾森（Ziehl－Neelsen）染色法和齊爾-加貝特（Ziehl－Gabbet）染色法。用石炭酸復紅染色后，用鹽酸乙醇分色，再用美藍進行對比染色，即不再脫色而呈現石炭酸復紅的紅色。
溶液配制
萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸復紅液：鹼性復紅4g，溶于95%酒精100ml，作成飽和溶液，再取該飽和液10ml與5%石炭酸溶液90ml混勻即成。
(2)3%鹽酸酒精液。
濃鹽酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)呂(Loeffer)氏美藍染色液
美藍2g，溶于95%酒精100ml中，作成飽和液。再取該飽和液30ml與0.01%氫氧化鉀水溶液100ml混合均勻即可。 展開 |
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