實驗目的
學習掌握細菌細胞壁的染色法。
實驗原理
細菌細胞壁很薄，組成細菌細胞壁的主要化學成分是肽聚糖，它與染料結合的能力差，不易著色，因此，欲通過染色來觀察細胞壁，必須設法使細胞壁能著色，而細胞質則不易著色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細胞壁形成可著色的復合物，而使細胞質不易被著色，經結晶紫或甲基綠染色后，便可在普通光學顯微鏡下觀察到細胞壁。
實驗材料
待染菌株，0.2%/5% 結晶紫水溶液，5%/10% 單寧酸（鞣酸）水溶液，1% 磷鉬酸水溶液，1%甲基綠水溶液，5% 剛果紅水溶液，顯微鏡
實驗步驟
1．單寧酸法（傳統方法）
（1）將培養16—18小時的菌株按常法制成涂片。
（2）用5％單寧酸染5分鐘后，水洗。
（3）用0．2％結晶紫染3—5分鐘，水洗，吹干。用油鏡觀察，細胞壁呈紫色，細胞質呈淡紫色。
2. 單寧酸法（改良方法）
（1）將培養16—18小時的菌株按常法制成涂片。
（2）用10% 單寧酸染60分鐘，其間在酒精燈火焰上微熱5min,水洗。
（3）用5% 結晶紫染5分鐘，水洗。
（4）加5% 剛果紅水溶液2min，水洗，待干，在顯微鏡的高倍鏡或油鏡下觀察，細胞壁呈紫色，細胞質呈淡紫色。
3. 磷鉬酸法
（1）制備濃厚的涂片，在未干時浸入1％磷鉬酸水溶液3－5分鐘。
（2）用1％甲基綠水溶液染3－5分鐘。
（3）水洗后，吹干，用油鏡觀察。細胞壁為綠色，細胞質無色。