一．設備
進行凝膠電泳的裝置見圖版4。
1）直流電源如果一次進行電泳的管數在20管以內可以用最大電流300毫安的整流器（硅或硒整流器），調壓范圍0—300伏。
2）電泳裝置包括二個緩沖液槽和電泳 管。液槽可以用玻璃或塑料制成，在底部鉆孔。插入電泳管，用有孔橡皮塞固定。電泳管選用孔徑均勻一致的玻璃管切制。長10厘米，內徑 ^5毫米。脫色用玻璃管長10厘米，內徑8毫米。底部稍拉尖，用半透膜及橡皮圈套住底部。
3）凝膠管架灌裝凝膠管時使管保持垂直位置，用有機玻璃制成。
二．操作方法
1）凝膠管的制備將電泳玻管用小橡皮塞塞住底部，然后灌入新配的凝膠溶液（方法見下文）。每管加至液體高度為7．5厘米。為了保證凝膠表面平整可用注射器通過細針頭小心地加一層（高約1厘米）蒸餾水于表面上，勿使與凝膠液混合，室溫放置。如果條件合適溶液于 30—60分鐘內聚合而成凝膠。凝膠溶液的配制方法如下：溶液甲：丙烯酰胺（氯仿重結晶）25克，雙體（甲醇重結晶）1克，加水配成100毫升溶液。必要時用三羥甲基氨基甲烷調pH至7．0。溶液乙：二甲氨基丙腈l毫升，三羥甲基氨基甲烷0．85克（也可用0．625克氨三乙醇或氨乙醇）加水至100毫升。溶液丙：K3Fe(cN)6分析純0．075克，加水至100毫升新配。用作阻聚劑以延緩凝聚時間。使操作方便，如凝聚時間已足夠長可以用蒸餾水代替。溶液丁：過硫酸銨（二級）2．8克加水至 100毫升新配。必要時用氨水調pH至7．0 c， 溶液甲及乙配后可在冰箱中保存數月。溶液丙及丁用時新配。臨用前將溶液甲、乙、丙、丁等量混合。
2）準備把已灌裝凝膠的玻管通過有孔椽皮塞安裝在上面液槽的底孔中，在上下兩槽內分別注入緩沖液。裝上后電泳管下端應浸沒在下槽的緩沖液中，管下端勿留氣泡。血清電泳可以用巴比妥緩沖液pH一8．6，離子強度0．05（配法：巴比妥鈉10．3克，二乙基巴比土酸1．84克，加水至1升，溫熱使溶。加硫柳汞0．1克防霉）。
3）加樣在資料介紹的方法中，一般還在了這一步。在血清樣品中加入少量蔗糖以增加密度，用血紅蛋白吸管直接小心地加在凝膠表面上，加樣量一般為7微升血清。如果在樣品中混入少量溴酚蘭指示劑就可以在電泳過程中觀察前沿移動的情況。
4）電泳在二液槽中安放鉑金絲電極；正極在下，負極在上。接通電源進行電泳，電場強度10伏/厘米左右，視室溫高低而定。室溫較高時宜用較低的電壓以免發熱過度影響分離。蛋白質向正極移動。侍染料前沿移動至管底近處，停止電流。電泳時間為1一2小時。電泳完畢取下凝膠管，用細長針頭沿管壁注蒸餾水，使凝膠與管壁剝開。然后用橡皮球壓出凝膠條。
5）染色及脫色電泳后的凝膠條在1%氨基黑10B在7%醋酸溶液中固定并染色1小時以上。染色后的凝膠條用7%醋酸洗滌數次。置于脫色玻管中，在同一電泳裝置中電解脫色。此時改用7%醋酸充裝在液槽中。通電后過剩凝膠之上再加一層大孔凝膠，樣品聚合在最后的另一層凝膠中（圖2）。在我們的試驗中省略的染料泳向正極。脫色時電場強度25伏/厘米，電流10—1 5毫安/管。3—4小時脫色完畢。增高電壓可以加速脫色。有色的醋酸溶液通過盛有活性炭的漏斗過濾，即可除去染料，重新使用。
6）保存與記錄脫色后的凝膠可以裝在盛有7%醋酸的有塞試管中保存數年。也可以自然干燥后保存，在需要觀察時再浸在7%醋酸中溶脹成原來形狀。記錄可以用照相攝影。也可以用光密度計進行捕記。光密度計的分辨力決定于其狹縫寬窄及光電管放大倍數。
三、實驗結果
1．電泳條件的選擇
為了選擇血清蛋白電泳較合適的條件，我們分別對單體濃度、雙體濃度、配制凝膠時所用不同正離子、各種電壓、二甲氨基丙腈的濃度、過硫酸銨的濃度等條件進行了試驗。根據以上試驗結果，我們在分離血清蛋白時選用的條件是：單體濃度6.25-6.5%，雙體占總丙烯酰胺量的4—5%，正離子采用三羥甲基氨基甲烷，二甲氨基丙腈及過硫酸銨濃度分別為0.25%及0.7%。電泳電壓以7—10伏/厘米較為合適。但電泳時間較長，約2—3小時，室溫低時可以電壓稍高。如果室溫較高則可以在冰箱中進行電泳。
2．人血清及其酒精分劃部分的凝膠電泳
采用上述條件我們進行了正常人血清的凝膠電泳。一般可以分成15—20條區帶。我們也根據RaFmand介紹的兩向電泳方法比較了紙電泳和凝膠電泳各區帶的相對關系。紙電泳上的a：區帶在凝膠電泳中可被分離成10條以上區帶。但紙電泳中d，區帶的一部分則與凝膠電泳中自蛋白區帶相重合。二種電泳方法所得的圖譜見圖版9。在正常人血清中后白蛋白（PA）、轉鐵蛋白(Tr）和觸珠蛋白（HP）均有不同的型， 一例骨髓瘤病人血清的和凝膠電泳自由電泳圖譜的比較見圖版11、12。我們也比較了酒精分劃人血漿各部分的紙電泳和凝膠電泳圖譜，結果見圖版13。從圖中可見在紙上電泳檢定時看來較純晦白蛋白和丙種球蛋白部分，在凝膠電泳中可見明顯的其他蛋白區帶。
3．放射病狗血清蛋白電泳的觀察 放射病動物血清蛋白的改變可以在紙電泳中觀察到。一般認為狗在照射后吻球蛋白有增高。用凝膠電泳觀察可以得到更深入的資 料。正常狗血清的凝膠電泳圖譜大致與人相 似。狗受致死量照射后第九天有明 顯變化，至極期時則可以觀察到鴨、Tr、融及 sp等區帶有明顯增高。我們用胎3—10型光 譜儀用光密度計將電泳圖譜進行了掃描，所得 結果見圖3，圖版14。由于儀器的限制光縫 最小只能達到0．5毫米，從而影響了其分辨力。但與正常血清對比可以見到其改變的情況，這 遠比紙電泳中所見更為明顯。我們認為如果聯 系臨床表現對變化的本質進行一些研究，將有 助于了解放射病極期來到前后體內蛋白質代謝的一些情況。
4．在分離正常人尿DNase時的凝膠電泳 觀察 用葡聚糖凝膠分離人尿中DNase時可以除去大部分其他蛋白質和雜質。但分離所得的制品用凝膠電泳觀察還可以見到五條以上的蛋白質區帶（見圖版14）。將凝膠條在未染色前置于含大分子DNA的瓊脂平板上，在37c’溫箱中保溫2—3小時，再用5%三氯醋酸加至如此處理過的瓊脂板上，可以看到乳白色本底上出現被酶水解后的透明斑點。將凝膠條用氨黑染色后顯示其蛋白區帶的位置。二者比較就可以確定具有酶活性的成分的相應電泳位置。我們的試驗中觀察到人尿DNase在凝膠電泳中至少被分離成二條以上有酶活性的區帶。說明有同功酶的可能。應用這一方法可以較深人地觀察體液中酶的情況。同時也說明可以用凝膠電泳來指示生物制劑制備過程中純化的情況。
四、結 論
本文介紹了聚丙烯酰胺凝膠電泳的一些初步實驗條件和實驗結果，并與紙電泳、自由電泳等進行了對比。從結果中可以看到聚丙烯酰胺凝膠電泳的分辨力較強，重演性良好。它在臨床生化分析及生物活性物質的分離、制備中和純度鑒定中具有較廣泛應用的可能性。