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  • 發布時間:2019-03-28 18:24 原文鏈接: 聚乙二醇沉淀法濃縮蛋白質實驗

    實驗方法原理

    聚乙二醇(PEG)是一個非離子水溶性多聚體,使用 PEG 沉淀蛋甶質時,只在個別濃度下才使蛋白質稍有變性。由于 PEG 溶解時散熱低,形成沉淀的子衡時間短等特點,使它在蛋白質的組分分離以及結晶中成為一個有用的試劑。通常 PEG 終濃度達 30% 時,蛋白質就能夠達到最大量沉淀。


    實驗材料

    蛋白質溶液

    試劑、試劑盒

    聚乙二醇 6000

    儀器、耗材

    燒杯磁力攪拌器和攪拌子離心機和轉頭

    實驗步驟


    1. 向 100 ml 蛋白質溶液中,在緩慢攪拌下加入 150 ml 50% PEG 6000(w/v 溶于蒸餾水);


    2. 繼續攪拌 30~60 min,至完全沉淀為止;


    3. 10 000×g 離心 10 min;


    4. 除去上清;


    5. 用 1~2 倍沉淀體積的緩沖液再懸浮沉淀。



    展開 
    注意事項

    1. 在等電點附近蛋白質溶解度降低。


    2. 用硫酸銨沉淀法能夠除去 PEG。也可采用離子交換層析,也有報道指出高濃度 PEG 使凝膠過濾柱層析行為異常。


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