聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）沉淀實驗檢測CIC

發布時間：2020-09-14 17:52 原文鏈接：聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）沉淀實驗檢測CIC

聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）是一種無電荷的直鏈大分子多糖，可非特異性地引起蛋白質沉淀。沉淀具有可逆性，被沉淀的蛋白質生物活性亦不受影響。不同濃度的 PEG可沉淀分子量不同的蛋白質，在pH值、離子濃度等條件固定時，蛋白質分子量越大，用以沉淀的PEG濃度越小。由于PEG6000對蛋白質沉淀具有良好的選擇性，所以在IC測定中主要采用PEG6000。

PEG使IC沉淀的機理可能在于使其自液相中空間排斥而析出，此外，PEG還可抑制CIC解離，促進CIC進一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀。在被檢血清中加入低濃度PEG，可將血清中的IC沉淀下來，利用透光率比濁或散射比濁法可測出CIC的存在與含量。本法簡便易行，國內已廣泛應用。

1、試劑

（1）0.1mol/L pH8.4硼酸鹽緩沖液（borate buffer solution，BBS）硼酸（H3B03）3.40g，硼砂（Na2B407·10H20）4.29g，蒸餾水溶解后，加至1 000mL。用G3或G4玻璃濾器過濾。

（2）PEG-NaF稀釋液 PEG6000 40.9g，NaF 10.0g，用BBS溶解后加至1000mL，用G3或G4玻璃濾器過濾。

（3）熱聚合人IgG 將人IgC（10mg/mL）置63℃水浴加熱15rain，立即置冰浴內，冷卻后過Sepharose4B柱或SephacrylS-300柱，收集第一蛋白峰。所獲熱聚合人IgG可用考馬斯亮藍法測定蛋白含量。也可取人IgG（10mg/ml）10ml，攪拌下滴加1.8%戊二醛100uL，24h后加入0.4mol/LpH5.4，Tris-HCl緩沖液100uL終止反應，過Sepharose 4B或Sephacryl S-300柱，用0.01mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液洗脫，收集第一蛋白峰。加入牛血清白蛋白至0.5%，分裝后-40℃保存。試驗中可用作陽性對照和制備標準曲線。

2、操作步驟

（1）取待測血清0.15ml，加BBS0.3ml（1：3稀釋）；

（2）按表10-1加入各液（待測血清最終稀釋倍數為1：33，PEG最終濃度為3.64%）；

（3）將測試管及對照管置37℃水浴60rrfin；

（4）分光光度計在波長495nm測吸光度，用對照管調零。

3、結果判斷

待測血清濁度值：（測定管吸光度—對照管吸光度）×100。以大于正常人濁度值的均值加2個標準差為CIC陽性。

參考值：4.3±2.0，以大于或等于8.3為CIC陽性。或以不同濃度熱聚合人IgG按以上方法操作制備標準曲線，根據待測血清吸光度值查標準曲線，即可得IC含量（相當于熱聚合人IgG的ug/mL）。

4、注意事項

（1）低密度脂蛋白可引起濁度增加，故應空腹采血；

（2）高丙球血癥或血脂含量過高及標本反復凍融，均可導致IC檢測出現假陽性；

（3）此法快速、簡便，但特異性較差，較適用于血清標本的篩查。