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  • 發布時間:2019-03-27 22:49 原文鏈接: 聚合酶鏈式反應(PCR)實驗

    PCR是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法。其特異性是由兩個人工合成的引物序列決定的。所謂引物就是與待擴增DNA片段兩翼互補的寡聚核苷酸,其本質是ssDNA片段。待擴增DNA模版加熱變性后,兩引物分別與兩條DNA的兩翼序列特異復性。此時,兩引物的3'端相對,5'向背。在合適的條件下,由Taq DNA聚合酶催化引物引導的DNA合成,既引物的延伸。上述過程是由溫度控制。這種熱變性-復性-延伸的過程就是一個PCR循環。PCR就是在合適條件下的這種循環的不斷重復。理論上擴增產物量成指數上升

    實驗材料

    DNA

    試劑、試劑盒

    MgCl2DNA聚合酶BufferdNTP

    儀器、耗材

    毛細管薄壁離心管PCR擴增儀瓊脂糖電泳

    實驗步驟

    1、 反應體系:

     

    (反應溶液可置于毛細管或薄壁離心管中擴增)


    2、操作過程:(所用儀器為AMP1605熱循環PCR擴增儀


    預變性:94 ℃ 90秒


    循環過程:94 ℃ 1秒 48 ℃ 1秒 72 ℃ 40秒  40個循環


    延伸:72 ℃ 5分鐘


    3、檢測:瓊脂糖電泳檢測。


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