腫瘤動物模型建立實驗（一）

一、腫瘤動物模型建立的意義：

（1）評價抗腫瘤免疫治療的療效；

（2）作為抗腫瘤藥物篩選模型；

（3）為腫瘤轉移研究提供更好的研究平臺；

（4）為研發抗腫瘤轉移性藥物提供良好的實驗工具。

二、誘發性腫瘤動物模型

實驗方法原理:誘發性腫瘤動物模型是指研究者用化學致癌劑、放射線、致癌病毒誘發動物的腫瘤等。

實驗材料：腫瘤細胞、小鼠性

試劑、試劑盒：無血清培養基質、3%中性甲醇、石蠟

儀器、耗材：低溫離心機、血球計數器、游標卡尺

實驗步驟：

1、肝癌

（1）二乙基亞硝胺（DEN）誘發大白鼠肝癌

① 取體重250 g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘；

② 按性別分籠飼養。除給普通食物外，飼以致癌物，即用 0.25%DEN水溶液灌胃，劑量為10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由飲用；

③ 共約4個月可誘發成肝癌；

④ 也可以單用0.005%摻入飲水中口吸服8個月誘發肝癌。

（2）4-2甲基氨基氮苯（DBA）誘發大鼠肝癌

① 用含0.06%DBA的飼料喂養大鼠，飼料中維生素B2 不應超過1.5～2 mg/kg；

② 4～6月就有大量的肝癌誘發成功。

（3）2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌

① 給成年大鼠含0.03% 2AAF標準飼料；

② 每日每平均2～3 mg 2AAF（也可將2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%動物產生肝腫瘤。

（4）二乙基亞硝胺誘發大鼠肝癌

① 用劑量為每日0.3～14 mg/kg體重，混于飼料或飲水中給予；

② 6～9個月后255/300大鼠發生了肝癌。

（5）亞胺基偶氮甲苯（OAAT）誘發小鼠肝癌

① 用1%OAAF苯溶液（約0.1 ml含1 mg）涂在動物的兩肩胛間皮膚上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。

② 實驗后7～8周即而出現第一個肝腫瘤，7個月以上可誘發小鼠肝腫瘤約55%。

③ 或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，給C3H小鼠皮下注射4次，每日間隔10天，也可誘發成肝癌。

（6）黃曲霉素誘發大鼠肝癌

每日飼料中含0.001～0.015 ppm，混入飼料中喂6個月后，肝癌誘發率達80％。 

2、胃癌

（1）甲基膽蒽誘發小鼠胃癌

① 取20 g左右的小鼠，無菌手術下，在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽蒽（MC）線結。

② 含MC的線結是用普通細線，在一端打結后，將線結置于盛有MC小玻璃試管內，在酒精燈上微微加溫，使MC液化滲入線結。MC濃度為0.05～0.1 g 20-甲基膽蒽內浸入10～20根線。

③ 手術埋線后4～8個月可誘發成功胃癌。

（2）不對稱亞硝胺誘發小鼠胃癌

劑量為0.25 ml/kg體重，3個月后全部動物發生前胃乳頭狀癌，7～8個月后有85～100%發生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。

（3）甲基亞硝基醋酸尿素誘發小鼠胃癌

給BD大鼠飲水中加甲基亞硝基醋酸尿素，劑量為2 mg/kg體重，每周飲用5次，520天后全部大鼠均發生了腺胃癌。 

3、食管癌

（1）甲基芐基亞硝胺（MBNA）誘發大鼠食管癌

① 取體重100 g以上的Wistar大鼠；

② 任其食用含甲基芐基亞硝胺的飲水，并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達0.75～1.5 mg/kg體重；

③ 80～100天可誘發成食管癌。

（2）二烴黃樟素（Dihydrosafrole）誘發大鼠食管癌

二烴黃樟素是一種制備啤酒的調味品，在大鼠飼料中加入百萬分之二千五百至一萬（2500～10000 ppm）黃樟素，就能引起20～75%的食管癌。

（3）甲基芐基亞硝胺誘發大鼠食管癌

① 用0.2%或0.005% 的甲基芐基亞硝胺水溶液，給動物經口灌喂，每天一次，大鼠灌注劑量為1 mg/kg體重；

② 至第27天即發現一例食管乳頭狀瘤，154天發現第一例食管癌， 11個月食管癌的發生率為53%。 

4、肺癌

（1）二乙基亞硝胺（DEN）誘發小鼠肺癌

① 小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次劑量56 mg/kg，DEN總劑量達到868 mg；

② 觀察時間為100天左右時，發癌率可達40%。

③ DEN總劑量達到1176 mg，觀察時間為半年左右時；發癌率可達94%。

（2）烏拉坦誘發肺腺癌

① 小鼠（A系， 1～11/2月齡）較大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3 ml，間隔3～5日再注，共注2～3個月，每只小鼠用量約為 100 mg；

② 注后3個月肺腺癌發生率為100%，而且多數為多發性，這種誘發瘤為良性。

（3）苯并芘誘發肺腺癌

① 猴氣管內注入3，4-苯并芘（苯并花為3～15 mg與等量之Fe₂O₃混合液），每周一次，共10次；

② 6只猴中有2只誘發肺的鱗狀上皮癌。 

（4）硫酸銨氣溶膠誘發肺腺癌

① 用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入；

② 13個月后所有大鼠都發生了肺腺癌。

（5）甲基膽蒽誘發肺腺癌

① 用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽蒽混合后給金地鼠氣管內注入，每次0.1 ml（含甲基膽蒽 5 mg）每周一次，共6次；

② 53周后有62.5%動物發生了肺癌。