(1)、應用自動分析儀時可根據儀器條件及試劑反應情況設計反應程序。自動分析儀要求酶反應快速(最好5min內完成反應)。反應慢的試劑只可用于手工操作，待反應達到終點時再比色。試劑和標本用量可根據比色杯容積按比例放大或縮小。
(2)、為保證酶反應迅速、完全并利于酶試劑長期穩定保存，要求酶制劑性能好、酶過量。酶試劑配好后一般應可在4℃存放3天以上。不同批試劑應檢查反應到達終點時間、顏色穩定性及線性范圍。
(3)、如樣品中膽固醇含量超出試劑線性范圍(一般酶試劑測定范圍應為5g/L以內)，可用生理鹽水稀釋標本再測，結果須乘以稀釋倍數。
(4)、血清中膽紅素0.1g/L以下、抗壞血酸0.05g/L以下及輕度溶血不至于影響結果。血清中其他類固醇含量甚微，不引起明顯干擾。
(5)、在儀器穩定及操作者熟練的情況下，批內CV<1%，批間CV<2%。
(6)、由于純膽固醇與血清膽固醇基質不同，反應速度不同，在酶法測定時如用純膽固醇標準結果往往偏低。因此主張用標準參考血清做標準以達到與血清標本相同的反應，標準參考血清應用參考方法，以附合國際標準的純膽固醇為標準標定。該標準血清可存放于-20℃保存1年。不宜反復凍融。