為了解決膽紅素試劑的穩定性,盡量排除基質效應對測定的影響,本科采用了雙試劑方法測定。現報告如下。
1 材料與方法
1.1 試劑組成 Trace試劑。總膽紅素試劑A:鹽酸0.1mol/L,對氨基苯磺酶0.050mol/L,表面活性劑1%;試劑B:亞硝酸0.072mol/L;直接膽紅素試劑A:鹽酸0.165mol/L,對氨基苯磺酶0.029mol/L;試劑B:亞硝酸0.072mol/L。
1.2 試劑配制
1.2.1 TBil單試劑法(TB 1 ) 試劑A:試劑B=50:1,使用前混合。
1.2.2 TBil雙試劑法(TB 2 ) 第一試劑R 1 為A;第二試劑R 2 為試劑B與雙蒸水50:1配制使用。
1.2.3 DBil單試劑法(DB 1 ) 試劑A:試劑B=100:1,使用前混合。
1.2.4 DBil雙試劑(DB 2 ) 第一試劑R 1 為A:第二試劑R 2 為試劑B與雙蒸水100:1配制使用。
1.3 儀器 美國康寧560生化分析儀。
1.4 測定主要參數 見表1。
2 結果
2.1 方法比較 本方法與改良J-G法比較,改良J-G法(見全國臨床檢驗操作規程第二版)為手工操作,設為Y,n=40,TB濃度2.76~456.3μmol/L,Y TB =0.995X TB +1.680,r=0.999,DB濃度0.89~402.8μmol/L,Y DB =1.011X DB +1.612,r=0.9984。
2.2 重復性試驗 總膽紅素批內n=10,ˉx 低 =34.3±0.46,CV%=1.34%;ˉx 高 =376.7±2.54,CV%=1.37%;直接膽紅素批內n=10,ˉx 低 =11.9±0.14,CV%=1.42%,ˉx 高 =169.3±2.54,CV%=1.50%;總膽紅素批間n=10(天),ˉx 低 =34.8±1.12,CV%=3.22%;ˉx 高=376.7±5.12,CV%=3.34%,直接膽紅素批間n=10(天),ˉx 低 =22.5±0.79,CV%=3.51%;ˉx 高 =167.9±5.23,CV%=3.62%。
2.3 回收試驗 取已知定值血清加入一定量標準品,測定其回收率,總膽紅素回收率96.8%~102.7%,平均為99.5%;直接膽紅素回收率為96.6%~103.2%,平均為98.8%。
表1 康寧560主要參數
注:ˇλ1為主波長,λ2為副波長,雙試劑第一時間點為樣品空白讀數