牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。
2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
胎牛血清都有哪些重要的指標
一、內毒素
內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有成分。當細菌死亡自溶或粘附在其它細胞時,才表現其毒性。內毒素直接參與細胞凋亡,血清中內毒素含量越低,對細胞毒性越小,越利于細胞的生長和傳代;內毒素含量過高,會直接導致細胞提前老化。國際上規定,胎牛血清的級別,應以內毒素水平的高低來確定,其中,特級胎牛血清的內毒素應<10EU/ml
二、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會根據血紅蛋白含量的不同表現出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細胞培養用血清的標準是血紅蛋白含量不高于20mg/dl,顏色越紅,數值越高;反之,數值越低。實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響。這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度,良好的操作能降低血清的溶血。
三、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,數值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數值偏低,表明血清可能摻水了。
四、pH值
根據藥典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒有什么具體依據把進口血清和國產血清用7.5這個分界線界定。
五、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間
六、微生物
包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個品牌血清生產條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。如CellMax胎牛血清,3次0.1um無菌過濾以后,又通過培養法和DNA染色法進行支原體檢測,結果均呈現陰性才會放行銷售。關于噬菌體主要是生產環境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清除,但對血清質量影響不大,不過對于工業生產的客戶來說,往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體。
七、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數值能完全體現出采血時的牛齡情況,新生牛血清容易產生IgM,IgG的含量也偏高;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也較低。可以通過血清蛋白電泳SDS檢測。
低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產及相關領域。
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