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  • 發布時間:2022-10-26 13:46 原文鏈接: 脂肪干細胞的Hoechst/PI死活染色介紹

      棄掉舊培養基,用D-Hanks 沖洗除去殘留培養基然后向每個Transwell 孔中加入質量濃度為1 mg/mL 的Hoechst 33342 大約10 μL,使其終質量濃度為10 μg/mL,37℃下避光反應10 min。待Hoechst 染色完成后,用D-Hanks 沖洗除凈殘余的Hoechst 染料接下來,再加入用PI 染液,使其終質量濃度為10 μg/mL,4 ℃下避光反應15 min,染色完成也用D-Hanks沖凈殘余染液最后,將染好的細胞置于倒置熒光顯微鏡下觀察、拍照。

      脂肪干細胞與文獻中描述的相一致。均形態完整,生長狀態良好,適合進行共培養的后續研究。為成脂誘導陰性對照組,表明脂肪干細胞不能自發生成脂質;在成脂誘導劑作用下,脂肪干細胞能夠生成脂質,經統計約有20.3%的脂肪干細胞發生了成脂分化。其中脂肪干細胞與脂肪細胞之比分別為1:5,1:1,2:1 和5:1(其中每孔中的脂肪細胞數均為1×105個),盡管在不同比例下對脂肪干細胞和脂肪細胞進行tranwell 間接共培養,然而經過8天共培養后,脂肪干細胞并不能象成脂陽性對照組那樣產生脂質油滴。

      此實驗結果的原因可能是由于共培養的持續時間過短所致。據文獻報導,成脂誘導分化的持續時間通常在1~2 周,即7~4d 左右。因此,有可能由于本實驗中脂肪細胞與脂肪干細胞共培養時間過短,導致脂肪干細胞與脂肪細胞沒能得到充分作用,所以不能實現成脂誘導分化。

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