脂肪細胞RNA提取原理

氯仿是分子量比較大的有機溶劑，在提取RNA時，氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離。DNA提取過程 有機相中主要是酚和蛋白結合，從而使得蛋白和DNA脫離，DNA進入水相。但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離，否則DNA會釋放到水相。不管有酚也好，沒有酚也好，氯仿本身也對蛋白有變性作用，劇烈的震蕩，很容易使得DNA的親水基團，與水相接觸。所以不要劇烈震蕩。
異丙醇的作用是通過-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA鏈中的親水基團受到保護，等同于沉淀，但是這是個反應時發生在水相中，與前面的氯仿不矛盾。
氯仿的作用有多個方面，一是作為有機溶劑變性蛋白，使其沉淀并通過離心除去，同時也通過變性作用抑制RNase活性；二是RNA提取試劑中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配試劑提的方法也用苯酚，抽提蛋白時也會用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去會損傷核酸，需要通過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉；三是作為溶劑抽提樣品中的一些脂溶性雜質（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除雜作用
通常氯仿里面會加少量異戊醇（1/25），減少蛋白質在變性過程中由于震蕩產生的泡沫，影響后續操作，不過個人經驗感覺加不加沒什么太大區別，也許是我的樣品里蛋白不多吧
異丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一樣。只不過用量少一點，0.6V~1V就夠了，不像乙醇沉淀需要至少2V，一般需要2.5倍體積。在水相很多，離心管容積有限，加不下太多乙醇的時候一般會用異丙醇沉淀。不過感覺效果不如乙醇，偶爾會有沉淀不出來東西的時候