脂質體介導的真核細胞轉染實驗——質體介導短暫表達

哺乳動物細胞

質粒DNA完全培養基氯化銫DMEM

培養皿培養箱聚苯乙烯管

1.  按5×10⁵細胞/孔的量在六孔板中接種指數期生長的細胞，在37℃ 5%CO₂培養箱中 培養過夜，直至細胞80%匯片。（如果用100 mm 培養皿代替六孔扳，則培養細胞至80%匯片，將所有數量擴大8倍）

2.  在聚苯乙烯管中配制DNA/脂質體復合物如下：稀釋質粒DNA至1 ml DMEM-SF中，在旋渦混合器上振蕩1 s 然后加入脂質體懸液、再次旋起混勻。在室溫下溫育5~ 10 min，使DNA與陽離子脂質體結合。

3.  吸去DMEM-SF培養液，用1 ml 的完全DMEM-SF洗1次，吸去DMEM-SF。對毎個35 mm 孔中，直接在細胞上加1 ml DNA/脂質體復合物。在37℃培養箱中溫育3~5 h。

4.  往每孔細抱中加入1 ml 的DMEM-20完全培養液，在37℃培養箱中繼續溫育24~48 h。

5.  吸去完全DMEM/DNA/脂質體復合物，毎孔加入2 ml 新的DMEM-10完全培養液，繼續搵育24~48 h。

6.  收集細胞：用細胞刮于刮下細胞，或胰蛋白酶消化或凍融裂解細胞。 進行適當的表達分析。