1、患者側臥于硬板床上，背部與桌面垂直，頭部盡量向前胸屈曲，兩手抱膝緊貼腹部，使軀干盡可能呈弓形；或由助手在術者對面用一手挽患者頭部，另一手挽雙下肢腘窩處并用力抱緊，使脊柱盡量后凸以增寬椎間隙，便于進針。
2、確定穿刺點，通常以雙側髂棘最高點連線與后正中線的交匯點為穿刺點，此處相當于第3-4腰椎棘突間隙，有時也可以在上一或下一腰椎間隙進行。
3、常規消毒皮膚后戴無菌手套、蓋洞巾，用2%利多卡因自皮膚到椎間韌帶做逐層局部麻醉。
4、術者用左手固定穿刺點皮膚，右手持穿刺針以垂直背部、針尖稍斜向頭部的方向緩慢刺入，成人進針深度約為4-6cm，兒童約2-4cm。當針頭穿過韌帶與硬腦膜時，有阻力突然消失感。此時可將針芯慢慢抽出(以防腦脊液迅速流出，造成腦疝)，可見腦脊液流出。
5、放液前先接上測壓管測量壓力。正常側臥位腦脊液壓力為70-180mmH2O(0.098Kpa=10mmH2O)或40-50d/分。若繼續做queckenstedt試驗，可了解蛛網膜下腔有無阻塞。即在測初壓后，由助手先壓迫一側頸動脈約10s，再壓另一側，最后同時按壓兩側頸動脈。正常時壓迫頸動脈后，腦脊液壓力立即迅速升高一倍左右，解除壓迫后10-20s，迅速降至原來水平，稱為梗阻試驗陰性，表示蛛網膜下腔通暢；若壓迫頸動脈后，不能使腦脊液壓力升高，則為梗阻試驗陽性，示蛛網膜下腔完全阻塞。若施加壓力后緩慢上升，放松后又緩慢下降，示有不完全阻塞。但是顱內壓增高者，禁做此試驗。
6、撤去測壓管，收集腦脊液2-5ml送檢；如需作培養時，應用無菌試管留標本。
7、術畢，將針芯插入后一起拔出穿刺針，覆蓋消毒紗布，用膠布固定。
8、去枕平臥4-6小時，以免引起術后低顱壓頭痛。
