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  • 發布時間:2019-09-14 08:15 原文鏈接: 腺苷三磷酸酶的測定實驗

    • 基本方案

               

    實驗方法原理

    ATP → ADP+Pi


    很多 ATP 酶是與膜組分聯系在一起的酶,比如氧化磷酸化或離子轉運系統。在細胞勻漿中或膜懸浮物中必須測定它們的不溶性。

    實驗材料

    酶樣品

    試劑、試劑盒

    TES-Tris ATP MgCl2 BSA 溶液 十二烷基硫酸鈉

    實驗步驟


    在 37 ℃ 下輕輕地振蕩培養 1 ml 含有 5~20 ul 膜懸浮物樣品的實驗混合物,并在一定的時間內(1 min、5 min、10 min,取決于酶活力)停止振蕩加入 1 ml SDS 溶液。無機磷酸的生成量根據磷酸定量方法來測定,用 1 min 生成的磷酸的物質的量(umol)來計算酶活力。

             
    注意事項
    其他

    試劑:


    0.1 mol/L TES-Tris,pH 7.5[N-tris(羥甲基)甲基-2-氨乙基磺酸,Mr=229.3;3.44 g 溶于 100 ml,用 0.2 mol/L 的tris(羥甲基)氨基甲烷(Tris,4.84 g 溶于 200 ml)調節 pH 到 7.5,到 200 ml]


    0.1 mmol/L ATP(二鈉鹽,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.1 mmol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 g 溶于 10 ml 水中)


    BSA 溶液,100 mg 溶于 100 ml


    10%(質量濃度)十二烷基硫酸鈉(SDS)

    展開


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