基本方案
實驗方法原理 |
ATP → ADP+Pi 很多 ATP 酶是與膜組分聯系在一起的酶,比如氧化磷酸化或離子轉運系統。在細胞勻漿中或膜懸浮物中必須測定它們的不溶性。 |
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實驗材料 | 酶樣品 |
試劑、試劑盒 | TES-Tris ATP MgCl2 BSA 溶液 十二烷基硫酸鈉 |
實驗步驟 |
在 37 ℃ 下輕輕地振蕩培養 1 ml 含有 5~20 ul 膜懸浮物樣品的實驗混合物,并在一定的時間內(1 min、5 min、10 min,取決于酶活力)停止振蕩加入 1 ml SDS 溶液。無機磷酸的生成量根據磷酸定量方法來測定,用 1 min 生成的磷酸的物質的量(umol)來計算酶活力。
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注意事項 | |
其他 |
試劑: 0.1 mol/L TES-Tris,pH 7.5[N-tris(羥甲基)甲基-2-氨乙基磺酸,Mr=229.3;3.44 g 溶于 100 ml,用 0.2 mol/L 的tris(羥甲基)氨基甲烷(Tris,4.84 g 溶于 200 ml)調節 pH 到 7.5,到 200 ml] 0.1 mmol/L ATP(二鈉鹽,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mmol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 g 溶于 10 ml 水中) BSA 溶液,100 mg 溶于 100 ml 10%(質量濃度)十二烷基硫酸鈉(SDS)
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