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  • 3.2.2 檢查所有的機械連接。

    我們可以抓住探頭輕微嘗試在所有方向上來回快速移動。如果手指感覺到細微的卡拉聲,說明系統某處有松動。另一個測試是輕輕敲打顯微鏡并觀察電極尖端,如果電極過分顫動,表明問題來自固定微操的平臺。

    3.2.3 檢查探頭和電極夾持器。

    我們卸下探頭,將玻璃電極直接固定在微操上,可檢查電極尖端是否漂移。我們根據經驗判斷,大多數漂移都是探頭和電極夾持器導致的。為了消除施加負壓的膠皮管對夾持器的應力,需要選擇盡可能軟且輕的加膠皮管并固定在探頭或懸掛以消除重力的影響。Axon公司早期的探頭HL-1/2使用的是無螺紋固定的夾持器,固定依靠錐形特弗隆插頭和插座的摩擦力,在多次使用后,摩擦引起特弗隆變形而使這種連接變得不穩定。Axon后來改進的HL-U,使用了螺紋連接,但旋上HL-U時切忌過分用力緊固,否則特弗隆螺紋的緩慢松弛會導致嚴重的漂移。HEKA公司的夾持器非常穩定。HEKA使用了一個優質BNC插頭來固定夾持器到探頭上。這種連接配合緊密,機械穩定性非常好。HEKA還加長了螺帽,并在螺帽中插入了一個圓柱,該圓柱可以精確引導和固定兩個O型圈,以消除在夾持器內的電極移動。第三個在金屬針尾端的O型圈可以防止整個夾持器相對BNC插座的移動,該設計還保證了當施加負壓時,不會引起電極移動。

    3.2.4 檢查電纜的應力。

    我們需要確保微操各個軸能夠全程平滑移動,這可以檢查微操驅動器是否工作正常,移動軸有沒有阻礙。要保證所有電纜是自由放置的,沒有給微操施加作用力。更換電極時,微操和探頭電纜都有明顯扭動,這會產生剩余應力,當這些應力慢慢釋放時就會導致漂移。如果觀察到的漂移在幾分鐘內有幾個微米,漂移可能就來自電纜應力。我們可將微操電纜盤成柔軟的大圈環,并使所有電纜在微操直線運動和旋轉運動范圍內都是松軟的。在微操運行時,電纜不能被擠壓拉伸。我們還可以將所有的電纜都垂直支持懸掛在微操的中心線上方,可以最小化應力。

    4. 小結

    本文主要討論了膜片鉗記錄系統中的電學噪聲和機械干擾問題。我們仔細分析了各種干擾的來源,并給出了許多有效的解決措施。這是我們近些年來安裝調試多套HEKA和Axon系列膜片鉗系統的經驗總結。我們的分析結論和處理方法,對于國內許多膜片鉗實驗室進一步優化系統,具有參考價值。膜片鉗單通道記錄對低噪聲、低震動和低漂移的要求是非常高的,因此本文對于常規電生理記錄系統,也具有一定參考意義。

    參 考 文 獻

    [1]  E Neher ,B Sakman. The Patch Clamp Technique. Sci . Amer . ,1992 ,Mar :44 ~51

    [2]  Rivka Sherman-Gold,, The Axon Guide for Electrophysiology Techniques, Axon Instruments, Inc.,1993,19-23.

    [3]  周專,康華光.膜片鉗系統的噪聲分析[J ] ; 中國生物醫學工程學報,1992 ,11(2) :128 - 137.

    [4]  康華光.細胞電生理與膜片鉗技術[J ];  中國醫療器械雜志, 2000, 24 (3) : 155- 160.

    [5]  婁雪林,周專.康華光單通道和全細胞記錄技術[J]; 中國醫療器械雜志, 2000, 24(4): 221- 226.

    [6]  Axon,  Axopatch200B_manual_Rev_D, 2001, Specifications, 103-105.  

    [7]  Axon,  MultiClamp700B_manual_Rev_C, 2004, Specifications, 141-146.  

    [8]  HEKA , Low-Noise Recording, Heka EPC10_manual, 2003,  66-68.  

    [9]  Pipette Drift Sources and Solutions for Patch Clamp Recording Experiments,  Burleigh  Instruments , Inc. Application Note

    [10] Richard A, Rae, JamesL, Low-Noise PatchClamp Techniques. Methods Enzymology. 1998, 293:218-266

    [11]  F.Sachs., A Low Drift Micromanipulator Holder, European Journal of Physiology 1995, 429:434-435.

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