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  • 發布時間:2019-04-08 22:16 原文鏈接: 莢膜染色實驗——干墨水法

    實驗方法原理莢膜是包圍在細菌細胞外的一層粘液狀或膠質狀物質,其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和力弱不易著色;而且可溶于水,易在用水沖洗時被除去。所以通常用襯托染色法染色,使菌體和背景著色,而莢膜不著色合在菌體周圍形成一透明圈。由于莢膜含水量高。制片時通常不用熱固定,以免變形影響觀察。
    實驗材料

    褐球固氮菌/膠質芽孢桿菌(約 2d 無氮培養基瓊脂斜面培養物)

    試劑、試劑盒

    繪圖墨水1% 甲基紫水溶液1% 結晶紫水溶液6% 葡萄糖水溶液20% 硫酸銅水溶液甲醇

    儀器、耗材

    載玻片蓋玻片濾紙顯微鏡

    實驗步驟

    1. 制混合液

    加一滴 6% 葡萄糖液于潔凈載玻片的一端,然后挑取少量菌體與其混合,再加一環墨水,充分混勻。


    2. 涂片

    另取一端邊緣光滑的載玻片作推片,將推片一端的邊緣置于混合液前方,然后稍向后拉,當推片與混合液接觸后,輕輕左右移動,使之沿推片接觸的后緣散開,爾后以大約 30° 角迅速將混合液推向玻片另一端,使混合液鋪成薄層(圖 IV-4)。


    3. 干燥

    空氣中自然干燥。


    4. 固定

    用甲醇浸沒涂片固定一分鐘,傾去甲醇。


    5. 干燥

    在酒精燈上方用文火干燥。


    6. 染色

    用甲基紫染 1~2 min。


    7. 水洗

    用自來水輕輕沖洗,自然干燥。


    8. 鏡檢

    用低倍和高倍鏡觀察。


    背景灰色,菌體紫色,菌體周圍的清晰透明圈為莢膜。

    展開 
    注意事項

    玻片必須潔凈無油漬,否則,涂片時混合液不能均勻散開。


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