連接于二抗的標記物是為了檢測抗體的結合，選擇標記物依賴于幾個參數：
檢測方法：
熒光或著色沉淀，熒光標記物用特殊波長的光激發時發射出可見光
封片介質（僅免疫組化）：
AEC, Fast Red, INT 或其它水性發光基團是可以醇溶的并要求水性封片. 除上述之外的發光基團是有機的所以最好使用有機性封片介質。
熒光素標記物要求水性封片介質，藻紅蛋白(藻青素 / 藻紅素要求不添加甘油的水性封片介質，因其有淬滅熒光的效應，
?生物素化的抗體：
通常用于加強親和素-生物素-酶或熒光素復合物（ABC試劑或親和素或鏈霉親和素連接酶或熒光素的信號）