1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；
2、引物、探針的設計；
3、引物探針的合成；
4、反應體系的配制；
5、反應條件的設定；
6、反應體系和條件的優化；
7、熒光曲線和數據分析；
8、標準品的制備；
