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  • 發布時間:2022-10-18 18:24 原文鏈接: 熒光定量PCR技術的檢測原理和方法

    1.SYBRGreenⅠ法:

    在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。

    SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖

    PCR產物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴增產物的單一性)

    2.TaqMan探針法:

    探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成完全同步。


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