熒光定量pcr溶解曲線沒有峰

熒光定量pcr溶解曲線沒有峰是因為：一般每加溫一度，讀一次信號，當溫度到達PCR產物的Tm時，產物解離一下增多，曲線的橫坐標是溫度，縱坐標是熒光信號的變化，開始加熱，信號變化不大，所以幾乎是平的。

當加熱接近于PCR產物Tm時，雙鏈開始解離，熒光強度變小，機器會比較前后2個溫度點的熒光強度，把2者的差值標在圖上。Tm到達時，有一般雙鏈解離，這時的熒光強度變化最大（峰值）。再加熱，雙鏈全部解離，所以熒光強度的變化又變小了。

技術原理

將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性，低溫復性，適溫延伸的熱循環，并遵守聚合酶鏈反應規律，與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應體系中。

在特定光激發下發出熒光，隨著循環次數的增加，被擴增的目的基因片段呈指數規律增長，通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度，求得Ct值，同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照，即可得出待測標本目的基因的拷貝數。