常用的熒光探針有熒光素類探針、無機離子熒光探針、熒光量子點、分子信標等。熒光探針除應用于核酸和蛋白質的定量分析外,在核酸染色、DNA電泳、核酸分子雜交、定量PCR技術以及DNA測序上都有著廣泛的應用。
檢測熒光探針的方法主要有單點測定和電荷耦合裝置(CCD)熒光成像(包括用于微區分析的激光共聚焦熒光顯微鏡成像)。由于光電倍增管點掃描時間較長,激光照射強度高,很難抓住熒光早期變化。而CCD熒光成像的面陣大,成像視野廣,成像時間可以調節,因而檢測效果比較好。
化學發光檢測的最大特點是設備簡單、操作簡便、分析速度快及靈敏度高。化學發光成像分析(CLI)是將化學發光與成像技術相結合,從而具有分辨率高、多樣品同時檢測、光譜響應范圍寬以及靈敏度高等特點[10,11],已廣泛應用于凝膠、蛋白印記及微陣列芯片中的化學發光信號檢測。本實驗建立了TCPO?咪唑?H2O2?熒光探針化學發光成像體系。由于化學發光不需要任何光源,因而在對熒光探針進行化學發光成像檢測時,不存在熒光檢測或者熒光成像時不可避免的光學背景的干擾,從而可以獲得更低的檢出限。用此體系對5種熒光探針進行定量分析,并研究了用四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)標記的單克隆羊抗人IgG的化學發光成像,檢出限達10-11mol/L,比相同條件下熒光成像的檢出限低一個數量級。